DEPÓSITO LEGAL ZU2020000153  
ISSN 0041-8811  
E-ISSN 2665-0428  
Revista  
de la  
Universidad  
del Zulia  
Fundada en 1947  
por el Dr. Jesús Enrique Lossada  
Ciencias del  
Agro,  
Ingeniería  
y Tecnología  
Año 16 N° 45  
Enero - Abril 2025  
Tercera Época  
Maracaibo-Venezuela  
REVISTA DE LA UNIVERSIDAD DEL ZULIA. 3ª época. Año 16, N° 45, 2025  
DOI: https://doi.org/10.5281/zenodo.14602220  
Jorge Vílchez & Nilca de Vílchez //Estudio del tiempo y la frecuencia de inmersión en la multiplicación... 110-119  
Estudio del tiempo y la frecuencia de inmersión en la multiplicación in vitro de  
Paulownia elongata S.Y.Hu.  
Jorge Alberto Vílchez-Perozo *  
Nilca Rosa Albany de Vílchez **  
RESUMEN  
La mayoría de los clones comerciales de paulonia son micropropagados y hoy en día se investigan  
técnicas de micropropagación que permitan reducir los costos de las vitroplantas, como el  
cultivo en sistemas de inmersión temporal que han demostrado ser altamente eficientes para la  
multiplicación in vitro de muchas especies. El tiempo y la frecuencia de inmersión en los sistemas  
de inmersión temporal son los principales parámetros que determinan su eficiencia, es por ello  
que se planteó en esta investigación estudiar el tiempo y la frecuencia en la multiplicación in vitro  
®
de Paulownia elongata S.Y.Hu en Recipientes de Inmersión Temporal Automatizado (RITA ). Se  
realizó un experimento factorial para determinar la frecuencia (cada 6 y 8 h) y el tiempo (1 y 2  
min) de inmersión, con cinco repeticiones por tratamiento y 12 microesquejes de paulonia por  
repetición. Después de dos subcultivos de 30 días cada uno, se encontró que la combinación de  
una frecuencia de inmersión cada 8 h y 1 min de inmersión permitió obtener el mayor número de  
nudos (8,6) y coeficiente de multiplicación (10,0). Los mayores valores de número de brotes  
(
2,26) se lograron con la frecuencia cada 6 h, independientemente del tiempo de inmersión y la  
longitud de los brotes no fue afectada por las variables estudiadas. Se concluye que el tiempo y  
la frecuencia de inmersión resultaron determinantes para aumentar la multiplicación in vitro de  
P. elongata en los RITA®.  
PALABRAS CLAVE: Coeficiente de multiplicación, Micropropagación, Paulonia, RITA®,  
Sistemas de inmersión temporal.  
*Departamento de Botánica, Facultad de Agronomía, Universidad del Zulia, Maracaibo-Venezuela.  
ORCID: http://orcid.org/0000-0001-8360-2514 E-mail: jvilchezp@fa.luz.edu.ve  
**Departamento de Química, Facultad de Agronomía, Universidad del Zulia, Maracaibo-Venezuela.  
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0184-7583. E-mail: nalbany@fa.luz.edu.ve  
Recibido: 09/07/2024 Aceptado: 02/10/2024  
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DOI: https://doi.org/10.5281/zenodo.14602220  
Jorge Vílchez & Nilca de Vílchez //Estudio del tiempo y la frecuencia de inmersión en la multiplicación... 110-119  
Study of Time and Frequency Immersion in the in vitro Multiplication of  
Paulownia Elongata S.Y.Hu.  
ABSTRACT  
Most of the commercial clones of paulownia are micropropagated and nowadays  
micropropagation techniques are being investigated to reduce the costs of vitroplants, such as  
cultivation in temporary immersion systems, which have proven to be highly efficient for the in  
vitro multiplication of many species. The time and frequency of immersion in temporary  
immersion systems are the main parameters that determine their efficiency, which is why in this  
research it was proposed to study the time and frequency in the in vitro multiplication of  
Paulownia elongata S.Y.Hu in Automated Temporary Immersion Vessels (RITA®). A factorial  
experiment was conducted to determine the frequency (every 6 and 8 h) and time (1 and 2 min)  
of immersion, with five replicates per treatment and 12 paulownia microshoots per replicate.  
After two subcultures of 30 days each, it was found that the combination of a frequency of  
immersion every 8 h and 1 min of immersion allowed obtaining the highest number of nodes (8.6)  
and multiplication coefficient (10.0). The highest values of number of shoots (2.26) were  
achieved with the frequency every 6 h, independently of the immersion time and the length of  
the shoots was not affected by the variables studied. It is concluded that time and frequency of  
immersion were determinant in increasing in vitro multiplication of P. elongata in RITA®.  
KEYWORDS: Micropropagation, Multiplication coefficient, Paulownia, RITA®, Temporary  
immersion systems.  
Introducción  
El género Paulownia es originario de China y comprende nueve especies y varios híbridos  
naturales de árboles caracterizados por su rápido crecimiento y regeneración (Jakubowski,  
2
022; Bing et al., 2019). La paulonia es un árbol forestal utilizado en programas de reforestación  
debido a su gran adaptabilidad a diferentes tipos de suelos y condiciones climáticas  
Jakubowski, 2022; Rodríguez-Seoane et al., 2021). Además, tiene múltiples usos para la  
(
producción de madera, la fabricación de muebles, tableros e instrumentos musicales, en la  
alimentación animal, el biocarbón, la producción de biocompuestos y biocombustibles (Corrêa  
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et al., 2024; Sedighizadeh et al., 2023; Rodríguez-Seoanea et al., 2020; Testa et al., 2022; Stewart et  
al., 2018,). Hoy en día, las especies de paulonia se consideran los cultivos forestales más  
importantes del mundo (Shaaban et al., 2022).  
La propagación de paulonia se realiza principalmente a partir de semilla, siendo la  
propagación sexual lenta (Poș ta et al., 2022), sin embargo, en condiciones industriales, la  
reproducción es casi exclusivamente vegetativa (Jakubowski, 2022). Pero la mayoría de los  
clones se propagan comercialmente mediante la micropropagación. Esta técnica de cultivo in  
vitro de tejidos asegura la obtención de plantas genéticamente idénticas a la planta madre,  
grandes cantidades en un corto periodo de tiempo y el cultivo de plantas en condiciones estériles  
(
Shaaban et al., 2022; Fokina et al., 2020).  
Sin embargo, la micropropagación ha dejado de ser un proceso económicamente eficiente  
debido a sus altos costos (Mendoza et al. 2022), por el uso de un gran número de recipientes de  
cultivo, medios de cultivo gelificados y la manipulación manual de los tejidos en condiciones  
asépticas. También implica el subcultivo periódico (3-6 semanas) del material vegetal a medio  
de cultivo fresco debido al agotamiento de los nutrientes del medio y al continuo crecimiento y  
proliferación de los tejidos, que está limitado por el tamaño del recipiente (Maene y Debergh  
1
985).  
Los sistemas de inmersión temporal fueron concebidos para viabilizar la comercialización  
de la micropropagación, ya que con éstos se reducen los costos de producción (Preil, 2005) y  
permiten la automatización o semiautomatización de los sistemas de cultivo (Georgiev et al.,  
2014), además el principio someter al tejido de la planta cultivada a ciclos alternos de inmersión  
temporal (pocos minutos) en el medio líquido seguido del drenaje y la exposición del tejido a un  
medio ambiente gaseoso renovado mejoran considerablemente la producción y calidad de los  
cultivos in vitro (Georgievy col., 2014; Etienne y Berthouly, 2005), ya que estos facilitan la  
absorción de nutrientes por parte de los tejidos, disminuyen el tiempo requerido para el  
desarrollo de los cultivos, simplifican las operaciones de preparación y dispensado del medio,  
permitiendo establecer métodos de control y muestreo en cada etapa (Satyahari, 2005; Etienne  
y Berthouly, 2002).  
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El empleo de sistemas de inmersión temporal en la fase de multiplicación in vitro requiere  
de la estandarización de algunas condiciones específicas como lo son, el tiempo y frecuencia de  
inmersión, densidad de explantes por recipiente de cultivo, volumen de medio de cultivo, tiempo  
de subcultivo, entre otros, destacando el tiempo y la frecuencia de inmersión como los más  
críticos, ya que gobiernan el consumo de nutrientes en los tejidos cultivados (Berthouly y  
Etienne 2005). Por ello el objetivo de esta investigación fue estudiar el tiempo y la frecuencia en  
la multiplicación in vitro de Paulownia elongata S. Y. Hu en Recipientes de Inmersión Temporal  
Automatizado (RITA®).  
1
. Materiales y métodos  
Esta investigación se realizó en las instalaciones entre los meses de febrero a junio de 2022,  
en el laboratorio de Biotecnología “Profa. Silvia León de Sierralta” de la Facultad de Agronomía  
de la Universidad del Zulia en Maracaibo, Venezuela.  
1
.1. Procedimientos generales  
El pH de los medios de cultivo se ajustó a 5,8 con NaOH 1N y HCl 1N según el caso, antes  
de la esterilización en autoclave a 121 ºC y 20 PSI durante 20 min. Todas las manipulaciones de  
los explantes se realizaron bajo condiciones de asepsia empleando una cámara de flujo laminar  
horizontal de aire esterilizado, con un flujo constante de 1,0 PSI. El instrumental (pinzas y  
bisturíes) se desinfectó con una solución de NaClO al 1 % i.a. (v/v) durante 15 min y las cápsulas  
de Petri se esterilizaron en autoclave a 121 °C y 17 PSI durante 30 min y seguidamente se secaron  
en una estufa a 80 °C por 8 h.  
1
.2. Condiciones del cultivo  
Los cultivos in vitro se mantuvieron en un cuarto de crecimiento, bajo luz blanca  
2
fluorescente continua con una radiación fotosintéticamente activa de 200 μmol/m /s,  
temperatura de 26 ± 1 °C y humedad relativa promedio de 46 %.  
1
.3. Material vegetal  
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Se utilizaron microesquejes de Paulownia elongata S. Y. Hu, en fase multiplicación in vitro de  
un quinto subcultivo (subcultivada cada 30 días) en medio de Murashige y Skoog (1962),  
suplementado con 3 % de sacarosa y 7 mg/L de 6-Bencilaminopurina (BAP), gelificado con 6 g/L  
de gellangum.  
A fin de estudiar los parámetros de tiempo y frecuencia de inmersión adecuados, para la  
multiplicación in vitro de P. elongata mediante un diseño experimental completamente aleatorio  
con un arreglo factorial de los tratamientos se evaluaron cuatro tratamientos, resultantes de la  
combinación de dos tiempos de inmersión (1 y 2 min) y dos frecuencias de inmersión (cada 8 y 6  
h). Se utilizaron 5 repeticiones por tratamiento y cada repetición la constituyó un recipiente de  
®
inmersión temporal automatizado (RITA ) de 0,9 L de capacidad, cuyo funcionamiento y  
®
características son descritas por Etienne y Berthouly (2002). A cada RITA se le adicionaron 200  
mL de medio de cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) con 7 mg/L de BAP, 30 g/L de sacarosa.  
®
En cada RITA , se sembraron 12 microesquejes de 2 cm de longitud y con un nudo y de un quinto  
subcultivo de edad.  
Después de dos subcultivos de 30 días cada uno se evaluaron las siguientes variables:  
®
número de brotes (NB), contando los brotes de cada RITA ; número de nudos (NN) contando  
los nudos cada repetición; longitud de brote en cm, midiendo la distancia de cada nuevo brote  
desde su base hasta el ápice y coeficiente de multiplicación (CM), el cual se calculó mediante la  
siguiente fórmula: CM=(NB-1)(NN).  
1
.4. Análisis estadístico  
®
Data processing was carried out using Statistix version 8.0 analytical software (Analytical  
Software, Tallahassee, Florida, USA, 2003). Prior to statistical analysis, data obtained in each  
experiment were subjected to check the assumption of a normal distribution to the Shapiro-  
Wilk test a significance level of P ≤ 0.05 (Sokal and Rohlf, 2013). Subsequently, analysis of  
variance (ANOVA) was executed in order to determine the effect of the study factors with a  
significance level of P ≤ 0.05. In those cases, where the effect of the study factor and/or its  
interaction was statistically significant (P ≤ 0.05), mean comparison was performed using the  
Tukey's test.  
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2
. Resultados y discusión  
En ninguna de las combinaciones de tiempo y frecuencia de inmersión evaluadas se  
observaron brotes con evidencia de hiperhidratación de tejidos. El ANOVA detectó diferencias  
estadísticas (p≤ 0.05) para la interacción de los factores de estudio tiempo y frecuencia de  
inmersión sobre las variables evaluadas (cuadro 1) a excepción de la variable longitud de los  
brotes para la cual no se detectó diferencias estadísticas para los factores de estudio ni para la  
interacción, siendo el promedio de la longitud de los brotes de 1,47 cm  
Tabla 1. Efecto de dos frecuencias (cada 6 y 8 h) y dos tiempos de inmersión (1 y 2 min) sobre la  
multiplicación de micro esquejes de Paulownia elongata S. Y. Hu. Letras distintas en las variables  
difieren estadísticamente para la prueba de Tukey (P≤0,05).  
Factores de estudio  
Variables  
Coeficiente de Longitud de  
de nudos multiplicación brotes (cm)  
Frecuencia  
Tiempo  
Numero de Numero  
(
h)  
6
(min)  
brotes  
2,27 a  
2,25 a  
2,05 b  
1,85 b  
0,04  
1
2
6,0 b  
6,5 b  
8,6 a  
6,6 b  
0,17  
8,2 b  
9,5 a  
10,0 a  
6,8 b  
0,57  
1,30 ns  
1,51 ns  
1,55 ns  
1,46 ns  
0,05  
6
8
1
8
2
EE  
Los mayores valores de números de brotes se encontraron con las combinaciones de  
inmersión cada seis horas con uno (2,27 brotes) o dos (2,25 brotes) minutos de inmersión, cuales  
fueron estadísticamente similares entre si y diferentes a las combinaciones de inmersiones cada  
ocho horas por uno (2,05 brotes) y dos (1,85 brotes) minutos. Dolcet-Sanjuan et al (2024) han  
indicado que el desarrollo óptimo de los brotes en sistemas de inmersión temporal a partir de  
explantes de brotes internodales cultivados incluye la multiplicación por ramificación axilar, el  
alargamiento de los brotes y el desarrollo de las hojas sin vitrificación. En este ensayo  
conseguimos que independientemente del tiempo de inmersión el número de brotes fue mayor  
con inmersiones cada seis horas. En este sentido Etienne y Berthouly (2002) plantearon que en  
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los sistemas de inmersión temporal se favorece la producción de nuevos brotes, debido al  
movimiento de los explantes dentro del recipiente de cultivo durante cada inmersión, que afecta  
la dominancia apical y promueve la separación de los explantes. Preil (2005) indica que el  
aumento de la brotación in vitro en los sistemas de inmersión temporal puede ser debida una  
mayor superficie de contacto de absorción de nutrientes y de reguladores de crecimiento de los  
explantes. Resultados similares a los encontrados en esta investigación, fueron reportados por  
Cardenas (2014) para la multiplicación in vitro en sistemas de inmersión temporal de P. elongata,  
P. fortunei y su hibrido.  
El mayor valor de número de nudos fue de 8,6 nudos y se logró con la combinación de  
inmersiones cada ocho horas por un minuto de duración, siendo esta combinación superior a las  
demás evaluadas (tabla 1). El número de nudos depende del vigor que desarrolle el brote, brotes  
vigorosos desarrollaran entrenudos largos con pocas yemas axilares, en este ensayo con la  
combinación de inmersiones cada ocho horas de un minuto se obtuvo los mayores valores de  
numero de nudos y de coeficiente de multiplicación. Mientras que para el coeficiente de  
multiplicación las combinaciones de inmersiones cada seis horas por dos minutos (9,5) y de cada  
ocho horas por un minuto de inmersión (10) (tabla 1). En ese sentido, Bello-Bello et al. (2019)  
indican que los sistemas de inmersión temporal promueven el aumento de la tasa de crecimiento  
de las plantas en muchas especies al mejorar la ventilación del recipiente de cultivo. Esto  
promueve los procesos fisiológicos como la fotosíntesis, la respiración, el desarrollo de la  
clorofila y la función estomática para que puedan adaptarse bien al entorno ex vitro durante la  
aclimatación (Aragon et al. 2014). Bouman y Tiesktra, (2005) reportan que en los sistemas de  
inmersión temporal los nutrientes precipitado en el medio de cultivo se reedisuelven, debido a  
una disminución del pH o por la absorción de los tejidos o explantes de componentes disueltos  
en el medio de cultivo y el cambio resultante en el equilibrio de la disociación, provoca la  
disolución de los precipitados  
Conclusiones  
Se concluye que menos frecuencia y tiempos de inmersión favoren la multiplicación in vitro  
de microesquejes de Paulownia sp. en sistemas de inmersión temporal.  
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Referencias  
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Conflicto de interés  
Los autores de este manuscrito declaran no tener ningún conflicto de interés.  
Declaración ética  
Los autores declaran que el proceso de investigación que dio lugar al presente manuscrito se desarrolló  
siguiendo criterios éticos, por lo que fueron empleadas en forma racional y profesional las herramientas  
tecnológicas asociadas a la generación del conocimiento.  
Copyright  
La Revista de la Universidad del Zulia declara que reconoce los derechos de los autores de los trabajos  
originales que en ella se publican; dichos trabajos son propiedad intelectual de sus autores. Los autores  
preservan sus derechos de autoría y comparten sin propósitos comerciales, según la licencia adoptada  
por la revista  
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Internacional  
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