kmKasmeraKasmera0075-52222477-9628Universidad del Zulia10.5281/zenodo.4276390Artículo OriginalToxocara spp. y otros helmintos en muestras de suelo de plazas y parques de Puerto Ordaz, municipio Caroní, estado Bolívar, VenezuelaToxocara spp. and others helminthes in soil samples from squares and parks in Puerto Ordaz, Caroní municipality, Bolívar state, Venezuela0000-0002-8903-5968DeveraRodolfo Antonio10000-0002-5519-3247Arias-LópezVíctor Daniel10000-0001-9728-2638Vera-RamírezFelipe José10000-0003-3279-6384Amaya-RodríguezIván Dario10000-0003-1345-1313Blanco-MartínezYtalia Yanitza1Universidad de Oriente, Núcleo Bolívar. Escuela de Ciencias de la Salud. Departamento de Parasitología y Microbiología. Grupo de Parasitosis Intestinales. Ciudad Bolívar-Bolívar. Venezuela.Universidad de OrienteUniversidad de OrienteNúcleo Bolívar. Escuela de Ciencias de la SaludDepartamento de Parasitología y Microbiología. Grupo de Parasitosis IntestinalesCiudad BolívarBolívarVenezuelaAutor de Correspondencia: Devera Rodolfo Antonio. E-mail: rodolfodevera@hotmail.com
Los autores declaran no presentar conflictos de relaciones y actividades
DRA: conceptualización, software, investigación, recursos, redacción-revisión y edición. ALVD y VRFJ: metodología, análisis formal, investigación, redacción-preparación del borrador original. ARID: software, validación, investigación, recursos, redacción-revisión y edición. BMYY: conceptualización, metodología, análisis formal, investigación, recursos, redacción-revisión y edición
Las plazas y parques son áreas de recreación, en especial para los niños; pero la presencia de huevos de Toxocara spp. y otros helmintos en dichos lugares puede representar un riesgo para contraer la toxocariasis y otras helmintiasis de origen zoonótico. Se realizó un estudio para determinar la presencia de huevos de Toxocara spp. y otros helmintos en plazas y parques de Puerto Ordaz, municipio Caroní, estado Bolívar, Venezuela. Cada plaza y parque seleccionado fue dividido en 4 cuadrantes y de cada uno se colectó una muestra de suelo la cual fue procesada mediante las técnicas de flotación de Willis-Malloy, Lutz y Araraki. En 8 (80%) plazas/parques se identificaron huevos o larvas de helmintos; hubo plazas/parques positivos en las tres parroquias de la ciudad. Del total de 40 muestras de tierra procesadas, 15 (37,5%) resultaron positivas para la presencia de larvas o huevos de helmintos, siendo la frecuencia de Toxocara spp. de 32,5% (13/40). Además de Toxocara spp., resaltó el hallazgo de Strongyloides spp. (5,0%), Ascaris spp. (2,5%) y Ancylostomideos (2,5%). En conclusión, se determinó una frecuencia de 80% de contaminación con huevos y larvas de helmintos en las plazas/parques evaluadas, destacando Toxocara spp. en el 32,5% de las muestras estudiadas
Abstract
The squares and parks are recreation areas, especially for children; but the presence of eggs of Toxocara spp. and other helminths in these places can represent a risk of contracting toxocariasis and other helminthiasis of zoonotic origin. A study was carried out to determine the presence of Toxocara spp. eggs and other helminths in squares and parks from Puerto Ordaz, Caroní municipality, Bolívar state, Venezuela. Each square was divided into 4 quadrants and from each one a soil sample was collected which was processed using the techniques of Willis-Malloy, Lutz and Araraki. Of the 10 squares studied, 8 (80%) identified helminth eggs or larvae; there were positive places in the three parishes. Of the total of 40 processed soil samples, 15 (37.5%) were positive for the presence of larvae or helminth eggs, being the frequency of Toxocara spp., of 32.5% (13/40). In addition to the presence of Toxocara spp. (32.5%), highlighted the finding of Strongyloides spp. (5.0%), Ascaris spp. (2.5%) and Ancylostomideos (2.5%). In conclusion, an 80% frequency of contamination with eggs and larvae helminth was determined in the squares/parks evaluated, highlighting Toxocara spp. in 32.5% of the samples studied
Palabras claves:helmintiasisToxocarazonas de recreaciónepidemiologíazoonosisKeywords:helminthiasisToxocararecreation areasepidemiologyzoonosisIntroducción
La toxocariasis es la infección causada por los nemátodos ascarídeos del género Toxocara, que incluye más de 30 especies; sin embargo, la infección humana es producida principalmente por T. canis (ascarídeo del perro) y en menor grado por T. cati (ascarídeo del gato). Es una zoonosis parasitaria que se adquiere con gran facilidad, cuando las personas tienen contacto con heces de animales infectados 1.
La primera forma clínica identificada de toxocariasis fue larva migrans visceral 2. La infección humana es accidental y los parásitos en el cuerpo humano no pueden completar su maduración. Debido a esto, las larvas que ingresan al cuerpo migran durante meses, ocasionando reacción inflamatoria local y sistémica, según el órgano afectado; puede haber hemorragia, necrosis, reacción inflamatoria eosinofílica y eventualmente la formación de granulomas y finalmente la consecuente muerte del parásito 2-4.
La infección humana de Toxocara spp. debe diferenciarse de la infección en los otros animales y ésta ocurre por: 1) ingestión de huevos larvados que eclosionan en el intestino delgado, liberando las larvas, las cuales penetran la pared intestinal e ingresan a la circulación, a través de la cual migran hasta ubicarse en órganos como: hígado, pulmones, cerebro u ojos 4; 2) transmisión vertical (infección congénita) por circulación sanguínea transplacentaria reportada en un neonato prematuro que desarrolló retinopatía 5. Este mecanismo es poco frecuente en humanos, siendo más común entre los perros. 3) contacto directo con las heces de caninos infectados, mal lavado de manos o consumo de vísceras y carne cruda o mal cocida de animales que sirven de alimento 1,3.
Como en el humano el parásito no es capaz de completar su ciclo biológico, las larvas permanecen enquistadas en diversos órganos y/o tejidos. Después de la ingestión de huevos infectantes, la cáscara se disuelve en el intestino, liberándose las larvas (L2/3) que al atravesar la mucosa intestinal viajan a través de los sistemas linfático y circulatorio hasta llegar al hígado y al pulmón, diseminándose desde allí a diversos tejidos. Según la localización, origina un síndrome característico 3,6.
Aunque la infección puede permanecer asintomática, con el trascurrir del tiempo aparecen los síntomas. Se han descrito 4 presentaciones clínicas: 1) Larva migrans visceral o sistémica, 2) larva migrans ocular, 3) larva migrans neurológica y 4) larva migrans encubierta 3. La presentación clásica y más común es la primera, la cual se manifiesta con una franca eosinofilia, hepatoesplenomegalia, y afectación pulmonar (tos, sibilancias e infiltrados ricos en eosinófilos) 7.
Es importante realizar el diagnóstico diferencial con otras patologías, ya que muchas de las presentaciones pueden confundirse con otras entidades clínicas. Generalmente, el diagnóstico de toxocariasis se realiza por descarte 6,7. El diagnóstico de la infección humana se basa generalmente en la detección de anticuerpos contra antígenos metabólicos del ascarídeo, usando técnicas inmunoenzimáticas, las cuales muestran buena sensibilidad y especificidad 8-10. El diagnóstico histopatológico puede ser realizado; pero la demostración de larvas de Toxocara spp., en material de biopsia es difícil y no suele emplearse de rutina 11.
La infección es más frecuente en niños y aunque el antecedente de contacto con mascotas es importante, no siempre es posible establecerlo 12. El suelo contaminado con huevos embrionados de T. canis, es la principal fuente de infección, habiendo sido encontrado una elevada prevalencia de huevos en suelos de jardines, calles, paseos públicos, parques, plazas y otros lugares de recreación 12,13. Ello es debido a que los perros con y sin dueño defecan en estos espacios y en la mayoría de los países en vías de desarrollo no hay controles sobre esta práctica, aunado a la ignorancia e irresponsabilidad de los dueños de los perros 3,12.
En la última década, en Venezuela, se ha llamado la atención sobre la importancia de plazas y parques como fuente de infección de toxocariasis. El estudio pionero de Cazorla y col., en el año 2007 14 evaluaron 38 parques públicos de la ciudad de Coro, estado Falcón. Los autores evaluaron parasitológicamente las muestras de suelos, mediante técnica de Willis-Malloy modificado. Los resultados revelaron la presencia de huevos de Toxocara spp., en el 63,1% de los parques estudiados. Luego, en el año 2008, Devera y col.15 en Ciudad Bolívar, estado Bolívar, demostraron la presencia de huevos de Toxocara spp., en heces de perros y muestras de suelo de 55% y 16,7%, respectivamente, de las 25 plazas y parques evaluados. A ese estudio, le siguieron otros en el estado Lara que señalaron frecuencias de entre el 25% y 62,5% según el lugar de esparcimiento investigado 16,17.
Trillo-Altamirano y col. 18 consideran que es importante conocer la magnitud de las infecciones por los helmintos zoonóticos del perro en las ciudades, principalmente en áreas de recreación y también identificar los factores asociados a la infección animal, que pudieran servir para tomar las medidas de control necesarias. Sumado a lo anterior, se debe considerar la gran cantidad de perros sin dueño existentes en muchas ciudades de Venezuela.
En base a lo anterior, se planteó realizar un estudio para determinar la frecuencia de Toxocara spp. y otros helmintos, en muestras de suelo de parques y plazas públicas de la ciudad de Puerto Ordaz en el municipio Caroní del estado Bolívar, Venezuela.
MétodosTipo de estudio:
la investigación fue prospectiva, observacional y de corte transversal, entre julio y agosto de 2019.
Área de estudio:
Puerto Ordaz (8°15′37″N 62°47′40″O), es una ciudad que se encuentra en el oeste del municipio Caroní, estado Bolívar, al sur-este de Venezuela y conforma junto a San Félix, Ciudad Guayana. Fue fundada en 1952 como puerto de exportación minera a orillas del río Caroní, en el punto donde éste fluye al Orinoco. Político-territorialmente Puerto Ordaz incluye a 3 de las 11 parroquias del municipio Caroní (Unare, Universidad y Cachamay) siendo todas urbanas.
Se localiza a 13 m.s.n.m. y se estima que tiene una densidad poblacional de 320 habitantes por km2. Puerto Ordaz tiene un clima tropical con un el periodo de invierno (mayo-septiembre) y otro de verano (octubre-abril). La temperatura promedio anual es 26,5 °C con una precipitación media anual de 1036 mm.
Universo:
estuvo conformó por las 21 plazas y parques públicos existentes en las parroquias Cachamay, Universidad y Unare, según el censo realizado.
Muestra:
estuvo constituida por 10 plazas y parques seleccionados de acuerdo a los siguientes criterios: 1) Fácil acceso 2) Presencia frecuente de personas y perros en sus instalaciones. Para los fines de este estudio, a cada plaza o parque seleccionado en las parroquias que conforman la ciudad de Puerto Ordaz, le fue asignado un código y su ubicación geográfica se muestra en la Figura 1.
Mapa de Puerto Ordaz mostrando las parroquias Unare, Cachamay y Universidad. Estado Bolívar, Venezuela. Plazas/parques de Parroquia Cachamay: C1, C2 y C3; Plazas/parques Parroquia Universidad: U1, U2, U3 y U4. Plazas/parques Parroquia Unare: Un 1, Un 2 y Un 3. INE: Instituto Nacional de Estadística e Información.
Recolección de datos:
para la colecta de la muestra de suelo, se tomaron aquellas superficies libres de cemento, asfalto y/o grama. Cada plaza o parque fue dividido en 4 cuadrantes siendo recogida una muestra de suelo en cada uno de ellos en una única visita a cada lugar. La tierra de cada punto seleccionado se recogió de la siguiente forma: con la espátula se tomaron 5 cm de la capa más superficial en un área de 10 cm de diámetro. La muestra de aproximadamente 200 g fue colocada en bolsas plásticas y etiquetadas apropiadamente. Posteriormente, se trasladaron al laboratorio y se refrigeraron a 4 (C hasta su procesamiento. El análisis se realizó en el Laboratorio de Diagnóstico Coproparasitológico del Departamento de Parasitología y Microbiología de la Escuela de Ciencias de la Salud UDO-Bolívar, en Ciudad Bolívar.
Análisis de las muestras:
cada una de las muestras de tierra, fue analizada con las técnicas de flotación de Willis-Malloy 19, sedimentación espontánea de Lutz 15,20 y la técnica de cultivo en placa de Araraki 21 con algunas modificaciones.
Cada muestra de tierra (aproximadamente 200 g) fue previamente lavada con 250 ml de agua destilada estéril y colada, primero en colador metálico y después por gasa en dos oportunidades. Para realizar la técnica de Willis-Malloy se usaron 10 ml de ese lavado ejecutándose la técnica en vasos plásticos descartables de 50 ml esa capacidad. El colado restante (aproximadamente 240 ml) se usó para realizar a técnica de sedimentación espontanea según descrito por Devera y col. 15. Para realizar el cultivo en placa de Araraki una porción (1-3 ml) del sedimento obtenido en la técnica de Lutz fue colocado en el centro de la placa de agar. Dichas placas fueron examinadas entre 24 y 72 horas después en busca de larvas de helmintos.
Análisis de los datos:
con la información obtenida se construyó una base de datos con ayuda del programa SPSS versión 22.0. Los datos se presentaron en tablas usando frecuencias relativas (%). Para comparar las variables que así lo ameritaron se empleó la prueba Ji al cuadrado ((2) con un nivel de confianza del 95% (p <0,05).
Resultados
De las 10 plazas estudiadas, en 8 (80%) se identificaron huevos o larvas de helmintos; hubo plazas positivas en las tres parroquias que conforman la ciudad. Del total de 40 muestras de tierra procesadas, 15 (37,5%) resultaron positivas para larvas o huevos de helmintos, siendo la frecuencia de Toxocara spp. de 32,5% (n=13).
Al estudiar la frecuencia de muestras de suelo positivas para huevos de Toxocara spp., se aprecia que en las 3 parroquias estudiadas la frecuencia fue similar, sin diferencias estadísticamente significativas ((2 = 1,14 g.l. = 2 p > 0,05) (Tabla 1).
Distribución de plazas y parques, según presencia de huevos de <italic>Toxocara</italic> spp. y parroquia estudiada. Puerto Ordaz, municipio Caroní. Estado Bolívar, Venezuela. 2019
Parroquia
Toxocara spp.
Sí
No
Total
n
%
n
%
n
%
Cachamay
3
30,0
0
0,0
3
30,0
Unare
2
20,0
1
10,0
3
30,0
Universidad
3
30,0
1
10,0
4
40,0
Total
8
80,0
2
20,0
10
100,0
(2 = 1,14 g.l. = 2 p > 0,05
De acuerdo a las plazas estudiadas, en dos de ellas las muestras de tierra examinadas no presentaron huevos de Toxocara spp., mientras que en las otras 8 el porcentaje de positividad osciló entre 25 y 75% (Tabla 2).
Muestras de suelo según presencia de huevos de <italic>Toxocara</italic> spp. Plazas y parques de Puerto Ordaz, municipio Caroní. Estado Bolívar, Venezuela. 2019
Plaza/Parque
Muestras de suelo
n
%
C1-Plaza Villa Alianza.
1/4
25,0
C2-Parque La Navidad.
1/4
25,0
C3-Plaza del Periodista.
3/4
75,0
U1-Plaza Chipia
2/4
50,0
U2-Plaza Jardín Levante
0/4
0,0
U3-Plaza Los Tubos
1/4
25,0
U4-Plaza Monumental CVG
1/4
25,0
Un1-Plaza Redoma La Piña.
0/4
0,0
Un2-Parque Lomas de Caroní
3/4
75,0
Un3-Plaza Polideportivo Venalum
1/4
25,0
Los helmintos diagnosticados en las 15 muestras de suelo positivas se presentan en la Tabla 3, además de la presencia de huevos de Toxocara spp. (32,5%), cabe destacar el hallazgo de Strongyloides spp. (5,0%), Ascaris spp. (2,5%) y Ancylostomideos (2,5%). En algunas muestras se encontraron larvas de nemátodos que no pudieron ser identificadas.
Helmintos en muestra de suelo de plazas y parques públicos de Puerto Ordaz, municipio Caroní. Estado Bolívar, Venezuela. 2019
Fase/Helmintos
n
%
Huevos Toxocara spp.
13
32,5
Larvas de Nemátodos*
5
12,5
Larvas de Strongyloides spp. **
2
5,0
Huevos Ascaris spp.
1
2,5
Larva Rhabditoide de Ancylostomideos
1
2,5
*No pudieron ser identificadas. ** Posiblemente, por el estudio morfológico, correspondiente a S. stercoralis: 1 muestra con larva rhabditoide y 1 muestra con larva filariforme
Cabe destacar que todas las placas realizadas con la técnica de Araraki resultaron negativas. Además, con la técnica de Willis-Malloy se identificaron huevos de Toxocara spp. en 9 muestras de tierra (22,5%); mientras que con la sedimentación espontanea se encontraron los huevos en 6 muestras (15,5%).
Discusión
En el presente estudio se determinó un porcentaje considerable de contaminación de muestras de suelo (37,5%) obtenidas de plazas/parques públicos de Puerto Ordaz, municipio Caroní del estado Bolívar. De las 10 plazas/parques estudiados, el 80% (n=8) estaba contaminado, resultando positivas al menos 1 de las 4 muestras de tierra estudiadas en cada una esas plazas y parques. En países latinoamericanos se han realizado diversos estudios en muestras de suelos donde se han encontrado frecuencias de igual forma elevadas incluso con cifras mayores al 60% 15,22,23.
Se identificaron tres géneros de helmintos diferentes (Toxocara spp., Strongyloides spp. y Ascaris spp.), siendo Toxocara spp. con 32,5% el más común. Este nivel de contaminación del suelo de las áreas recreacionales evaluadas con heces de perros infectados con Toxocara spp., lo confirman estudios previos donde se señalan al suelo como fuente de infección de toxocariasis en humanos, en especial niños por sus hábitos de juego y sus insuficientes medidas de higiene 24.
En el mundo se han evaluado los niveles contaminación de plazas y parques públicos por huevos de Toxocara spp. y otros helmintos 13,25-34. De igual forma, estudios realizados en América Latina, donde se han demostrado valores similares y en algunos casos inferiores a los resultados obtenidos en la presente investigación (23,26,27,31,33,35-38.
En Venezuela, también se ha evaluado la importancia de las plazas y parques como posible factor de riesgo para la trasmisión de toxocariasis, pero las investigaciones publicadas son escasas (4 en todo el país) 14-17. En ellas, la frecuencia de Toxocara spp. varió entre 55% y 100% cuando se consideran las plazas y parques y entre 25 y 50% respecto a las muestras de suelo estudiadas. Es decir, los resultados aquí encontrados están dentro de los rangos señalados en estudios previos realizados en los estados Falcón 14 y Lara 16,17.
Cabe resaltar que en el estado Bolívar solo se ha desarrollado un estudio 15 y la frecuencia de Toxocara spp. entre las muestras estudiadas fue de 28,8%, con 67% de las plazas, es decir, un resultado inferior al aquí determinado, que fue de 32,5% en las muestras de tierra y de 80% de las plazas. Hecho que pudiera explicarse por ser el municipio Heres en una Ciudad con un patrón social y desarrollo económico inferior a Puerto Ordaz.
Varios autores sostienen que una elevada prevalecía de Toxocara spp. en las muestras de suelo, además de la presencia de perros callejeros en las ciudades, hace que la toxocariosis se posicione como un problema de salud pública en muchos países latinoamericanos 14,15,26.
Existen grandes variaciones en la prevalencia en los diferentes países e incluso de una región a otra en una misma área geográfica. Ello se debe a la presencia de varios factores como: incremento o disminución de la población canina y felina, incremento o disminución de perros y gatos con dueño, pero sin desparasitación, presencia de estos animales en lugares de esparcimiento, el estado de mantenimiento de las plazas y parques, así como la falta de medidas higiénico sanitarias tendientes a controlar la presencia de excretas de estos animales en estos lugares 15,22,23.
Además de Toxocara spp., cabe resaltar la presencia en las muestras de suelo examinadas, de otros helmintos parásitos de interés médico, ya que además de la identificación de un huevo de Ascaris spp., se observaron larvas rhabditoides y larvas filariformes compatibles en morfología a Strongyloides. De ser esto cierto, ello pudiera indica contaminación fecal humana o de otros animales, de estos sitios; lo cual es posible si se considera que en algunos de estos lugares viven personas indigentes y perros sin dueño. En otros países de Latinoamérica se describe la presencia de larvas de S. stercoralis en muestras de suelo de parques, como es el caso de Colombia donde Cala y col. 36 y Díaz-Anaya y col. 31 han informado frecuencias superiores al 60%, de larvas rhabditoides de este nematodo, atribuyéndose al origen canino. Se considera que la presencia en muestra de tierra se explica por el ciclo de vida libre que puede hacer el helminto en estos sitios.
Todas las larvas encontradas (Strongyloides y otros helmintos) estaban vivas (activas y con movimiento). De acuerdo a Schacher 39 la presencia de larvas de nemátodos vivas en las muestras de tierra es un indicador del papel que cumple el suelo en el desarrollo de formas larvales. Éstas últimas pudieran corresponder a larvas de nemátodos de vida o por su parte ser larvas de Toxocara spp. recién eclosionadas
Contrario a lo encontrado en otros estudios 15,22,35,37, se determinó un porcentaje poco relevante de Ancylostoma spp., y no se encontraron huevos sino larvas rhabditoides. Esto llama la atención considerando que fue usada una técnica de elevada eficacia y sensibilidad (Willis-Malloy) para el diagnóstico de los huevos de estos helmintos; el resultado indica que estos nemátodos no son frecuentes en la población humana de la zona; pero contrasta con estudios previos que habían señalado una prevalencia importante en la población canina 15. Con base a este resultado, los suelos de las plazas y parques evaluadas representan un riesgo bajo para la adquisición de larva migrans cutánea, así como de ancylostomosis.
Cuando se evalúan las plazas de acuerdo a las parroquias estudiadas en las cuales se encontraron huevos de Toxocara spp., se verifica que no hubo diferencias significativas. En otros estudios se han encontrado diferencias de acuerdo al área geográfica, atribuyendo esos hallazgos al tipo de mantenimiento y de las plazas, extensión de las mismas, cantidad de perros sin dueño y estrato social de la población 25. La uniformidad socio-económica de la ciudad de Puerto Ordaz, así como de las parroquias que la conforman, pudiera explicar estos hallazgos. Sin embargo, es necesario comentar que en muchas de las plazas estudiadas se verificó la presencia de perros sin dueños, así como de heces de estos animales en el suelo.
Cáceres Pinto y col. 23 realizaron la evaluación sanitaria de parques en la ciudad de Abancay, Perú, y determinaron que aquellos parques considerados como no amigables, que fue la mayoría, presentaron el mayor porcentaje de contaminación por Toxocara spp. Esta clasificación de amigable y no amigable (puntuación según la infraestructura, ambiente y riesgo sanitario del sitio) aunque no fue realizada en el presente estudio, podría ser aplicado para futuras investigaciones.
Además, otro hecho a resaltar es que, aunque el parque se ubique en una ciudad importante con un gran desarrollo económico y social, no necesariamente implica menor contaminación de ésta. Pues según López y col. 40 los parques en mejor estado de conservación suelen ser los más contaminados debido a que la estructura y composición del suelo juegan un papel muy importante, pues la vegetación mantiene condiciones suficientes de humedad y microclimas favorables para el desarrollo de los huevos de Toxocara spp. Estos otros aspectos, aunque no fueron considerados en el presente estudio, pueden ser objeto de evaluación en futuras investigaciones pues como ya se comento hubo una uniformidad en cuanto a la presencia del helminto en casi todas las plazas (80%) y parroquias estudiadas (100%).
Todos los resultados demuestran el riesgo potencial de transmisión de esta zoonosis de perros, por lo que se deben implementar medidas para controlar el acceso de la población canina a las plazas y parques públicos; así como la promoción de la educación sanitaria en las comunidades aledañas a dichas plazas.
Finalmente, este es el primer estudio de este tipo realizado en el municipio Caroní y el segundo en el estado Bolívar, por lo que es necesario continuar con los estudios tanto en este municipio como es los otros del estado Bolívar, para así aportar más datos epidemiológicos de la toxocariasis en esta región.
En conclusión, en muestras de suelo de plazas y parques de Puerto Ordaz, municipio Caroní del estado Bolívar, se determinó una alta frecuencia de contaminación con huevos y larvas de helmintos, destacando Toxocara spp. en el 80% de las plazas evaluadas y el 32,5% de las muestras de tierra estudiadas.
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Los autores declaran no haber recibido financiamiento para el desarrollo de la presente investigación. Este proyecto de investigación fue autofinanciado.