Invest Clin 63(3): 218 - 234, 2022 https://doi.org/10.54817/IC.v63n3a02
Autor de correspondencia: Edwin Escobar-Guevara. Laboratorio de Inmunofisiología Celular y Cátedra de Inmu-
nología, Escuela de Medicina “José María Vargas”, Universidad Central de Venezuela, Caracas, Venezuela. Correo
electrónico: edscobar@gmail.com
Alteraciones en la producción de citocinas
en respuesta a Toxoplasma gondii aparecen
desde las etapas tempranas en pacientes
co-infectados con VIH-1.
Edwin Escobar-Guevara1,2,3, María de Quesada-Martínez4, Yhajaira Roldán-Dávila5,6,
Belkisyolé Alarcón de Noya7 y Miguel Alfonzo-Díaz1,8
1Laboratorio de Inmunofisiología Celular, Escuela de Medicina “José María Vargas”,
Universidad Central de Venezuela, Caracas, Venezuela.
2Cátedra de Inmunología, Escuela de Medicina “José María Vargas”, Universidad Central
de Venezuela, Caracas, Venezuela.
3Laboratorio de Fisiopatología, Centro de Medicina Experimental, Instituto Venezolano
de Investigaciones Científicas, Caracas, Venezuela.
4Cátedra de Fisiopatología, Escuela de Medicina “José María Vargas”, Universidad
Central de Venezuela, Caracas, Venezuela.
5Servicio de Infectología, Hospital “José Ignacio Baldó”, El Algodonal, Caracas.
6Cátedra de Microbiología, Escuela de Medicina “José María Vargas”, Universidad
Central de Venezuela, Caracas, Venezuela.
7Sección de Inmunología, Instituto de Medicina Tropical, Universidad Central de
Venezuela, Caracas, Venezuela.
8Cátedra de Fisiología, Escuela de Medicina “José María Vargas”, Universidad Central
de Venezuela, Caracas, Venezuela. Dirección Académica, Escuela Latinoamericana de
Medicina “Salvador Allende”, Caracas, Venezuela.
Palabras clave: VIH-1; Toxoplasma gondii; respuesta inmunitaria; co-infección.
Resumen. Tanto el Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 (VIH-1), como
el protozoo Toxoplasma gondii son capaces de infectar al ser humano e invadir
su sistema nervioso central (SNC). En individuos inmunocompetentes T. gondii
causa infecciones crónicas, generalmente asintomáticas; sin embargo, la inmu-
nodeficiencia asociada a etapas avanzadas de la infección por VIH-1, se relacio-
na con la pérdida del control de la infección parasitaria latente y enfermedades
graves a nivel del SNC, como encefalitis toxoplásmica. Este trabajo tuvo como
objetivo evaluar la evolución de la respuesta inmunitaria contra T. gondii en
pacientes co-infectados con VIH-1, en distintas etapas de la infección viral. La
respuesta contra T. gondii se evaluó a través de la producción in vitro de citoci-
nas en respuesta a antígenos parasitarios, en individuos con serología positiva
Respuesta anti-T. gondii en pacientes co-infectados con VIH-1 219
Vol. 63(3): 218 - 234, 2022
Alterations in the production of cytokines in response
to Toxoplasma gondii appear from early stages in patients
co-infected with HIV-1.
Invest Clin 2022; 63 (3): 218 – 234
Key words: HIV-1; Toxoplasma gondii; immune response; co-infection.
Abstract. Both HIV-1 and Toxoplasma gondii are able to invade central
nervous system and affect its functionality. Advanced HIV-1 infection has been
associated with defects in immune response to T. gondii, leading to reactivation
of latent infections and the appearing of toxoplasmic encephalitis. This study
evaluated changes in the immune response to T. gondii in different stages of
HIV infection. Immune response to T. gondii was assessed studying cytokine
production in response to parasite antigens in HIV-1-infected/T. gondii-non-
infected (P1), HIV-1/T. gondii co-infected (P2), HIV-1-non-infected/T. gondii-
non-infected (C1) and HIV-1-non-infected/T. gondii-infected (C2) individuals.
Patients (P1 and P2) were divided in early/asymptomatic (P1A, P2A) or late/
symptomatic (P1B/C, P2B/C) according to peripheral blood CD4+ T lympho-
cyte counts (>350 or <350/μL, respectively). The HIV-1 infection, from early/
asymptomatic stages, was associated with significant lower production of IL-2,
TNF-α and IFN-γ in response to T. gondii, when P2 patients were compared with
C2 controls. These early defects may impair anti-parasitic response in co-infect-
ed patients, allowing to reactivation of parasitic latent infection, enhancing the
risk of CNS damage and impairment of neurocognitive functions.
Recibido: 10-02-2022 Aceptado: 10-06-2022
INTRODUCCIÓN
Toxoplasma gondii es un parásito in-
tracelular obligado, que causa una de las
infecciones por protozoos más comunes en
el ser humano1, con una prevalencia global
promedio del 25,7 %2. En individuos inmu-
nocompetentes la infección por T. gondii es
usualmente crónica y el parásito se mantie-
ne en forma latente en el interior de quistes
en los tejidos del hospedador, especialmen-
te en el sistema nervioso central (SNC)3, 4.
para VIH-1 y negativa para T. gondii (P1), positiva para VIH-1 y T. gondii (P2),
negativa para VIH-1 y T. gondii (C1) y negativa para VIH-1 y positiva para T.
gondii (C2). Los pacientes (P1 y P2) se agruparon en tempranos/asintomáticos
(P1A, P2A) o tardíos/sintomáticos (P1B/C, P2B/C) de acuerdo a su recuento
de linfocitos T CD4+ en sangre periférica (>350 o <350 células/μL, respecti-
vamente). La infección por VIH-1, desde etapas tempranas, se asoció con una
producción de IL-2, TNF-α e IFN-γ en respuesta a T. gondii significativamente
menor. Estos defectos pueden entorpecer la respuesta anti-T. gondii en pacien-
tes co-infectados, aumentando la posibilidad de reactivación de las infecciones
latentes, lo que representa un riesgo para la integridad y funcionalidad del SNC.
220 Escobar-Guevara y col.
Investigación Clínica 63(3): 2022
Durante la infección aguda los taquizoítos
(forma del parásito en su fase de replicación
rápida5) proliferan activamente en diversas
células nucleadas que incluyen neuronas,
astrocitos y otras poblaciones celulares en
el cerebro6-8; luego, bajo la presión ejercida
por la respuesta inmunitaria, los bradizoítos
(forma del parásito en su etapa latente5), se
ubican dentro de quistes en las células in-
fectadas, estableciendo así la infección cró-
nica. La producción de interferón gamma
(IFN-γ), por células de la inmunidad innata9,
10 y adaptativa11, 12 es parte fundamental de la
respuesta protectora contra T. gondii13 y con-
duce a la activación de macrófagos, con pro-
ducción de factor de necrosis tumoral alfa
(TNF-α) y a la expresión de sintasa inducible
de óxido nítrico (iNOS)14, 15, creando un mi-
croambiente que lleva a la transformación
de taquizoítos en bradizoítos16. La produc-
ción de IFN-γ también es primordial para evi-
tar la reactivación de la infección crónica17,
18, y aunque diversas poblaciones celulares
participan en la producción de esta citoci-
na, el papel de los linfocitos T es esencial en
la respuesta protectora efectiva11, 12, 19, 20. En
esta respuesta inmunitaria contra T. gondii,
la interleucina-2 (IL-2) media la expansión
de los linfocitos T y de las células citotóxi-
cas naturales (NK)21, mientras que la IL-10,
con su papel modulador de la respuesta in-
munitaria y su efecto anti-inflamatorio, se
requiere para evitar el daño a los tejidos del
hospedador22, 23. Es notable que los estados
de inmunosupresión, como aquellos asocia-
dos con la infección avanzada por el virus de
inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1)24, 25,
puedan conducir a la reactivación de las in-
fecciones crónicas latentes, con ruptura de
quistes y proliferación de taquizoítos, provo-
cando una fuerte respuesta inflamatoria y la
destrucción de tejidos del hospedador5. En
el SNC la reactivación de la infección cró-
nica usualmente se presenta como encefali-
tis toxoplásmica, una importante infección
oportunista en pacientes con el síndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA)26. Debi-
do a que la progresión de la infección por
VIH-1, así como el deterioro de la respuesta
inmunitaria asociada con esta, son proce-
sos graduales27-29, este estudio se enfocó en
evaluar cómo se modifica la producción de
citocinas en respuesta a T. gondii en las dis-
tintas etapas de la infección por VIH-1 en los
pacientes co-infectados. La evaluación de la
producción de citocinas hizo posible eviden-
ciar alteraciones tempranas en la respuesta
anti-T. gondii, que podrían disminuir la capa-
cidad de control de las infecciones latentes,
con aumento del riesgo de reactivación de la
replicación parasitaria y de daños en la es-
tructura y funcionalidad del SNC.
PACIENTES Y MÉTODOS
Se incorporaron en el estudio 34 in-
dividuos adultos seropositivos para VIH-1 y
14 seronegativos, pacientes del Servicio de
Infectología del Hospital “José Ignacio Bal-
dó” de Caracas, de la Sección de Inmunolo-
gía del Instituto de Medicina Tropical y de
la Escuela de Medicina “José María Vargas”
de la Universidad Central de Venezuela en
Caracas. Todos los participantes firmaron un
consentimiento informado y el estudio fue
aprobado por los comités de bioética de las
instituciones participantes.
Los participantes fueron agrupados de
la siguiente manera:
• Grupo Control 1 (C1): 5 individuos
asintomáticos (2 hombres, 3 mujeres;
38 ± 4 años de edad), seronegativos
para VIH-1 y T. gondii.
• Grupo Control 2 (C2): 9 individuos
asintomáticos (6 hombres, 3 mujeres;
31 ± 12 años de edad), seronegativos
para VIH-1 y seropositivos para T. gondii.
• Grupo de Pacientes 1 (P1): 13 indi-
viduos (8 hombres, 5 mujeres; 37 ± 9
años de edad), seropositivos para VIH-
1 y seronegativos para T. gondii. Estos
pacientes se agruparon en base a su re-
cuento de linfocitos T CD4+ en sangre
periférica de la siguiente manera:
Respuesta anti-T. gondii en pacientes co-infectados con VIH-1 221
Vol. 63(3): 218 - 234, 2022
* Grupo P1A (“temprano/asintomáti-
co”): 5 individuos (2 hombres, 3 mujeres;
39 ± 6 años de edad), con recuentos de
linfocitos T CD4+ en sangre periférica ma-
yores a 350 células/μL.
* Grupo P1B/C (“tardío/sintomá-
tico”): 8 individuos (6 hombres, 2
mujeres; 36 ± 10 años de edad), con
recuentos de linfocitos T CD4+ en
sangre periférica menores a 350 célu-
las/μL.
• Grupo de Pacientes 2 (P2): 21 indi-
viduos (16 hombres, 5 mujeres; 37 ±
10 años de edad), seropositivos para
VIH-1 y T. gondii. Estos pacientes se
agruparon en base a su recuento de lin-
focitos T CD4+ en sangre periférica de
la siguiente manera:
* Grupo P2A (“temprano/asintomá-
tico”): 8 individuos (5 hombres, 3 mu-
jeres; 35 ± 10 años de edad), con re-
cuentos de linfocitos T CD4+ en sangre
periférica mayores a 350 células/μL.
* Grupo P2B/C (“tardío/sintomáti-
co”): 13 individuos (11 hombres, 2
mujeres; 38 ± 9 años de edad), con re-
cuentos de linfocitos T CD4+ en sangre
periférica menores a 350 células/μL.
Criterios de exclusión y Toma
de la muestra
La serología para VIH-1 se determinó
por pruebas de ELISA y Western Blot, y la
de T. gondii por ELISA (IgG e IgM) y avidez.
Los participantes no habían recibido terapia
anti-retroviral ni anti-toxoplásmica al mo-
mento del estudio. Los criterios de exclusión
incluían traumatismo cráneo-encefálico, en-
fermedades autoinmunes, enfermedades del
SNC no asociadas a VIH-1, abuso o dependen-
cia al alcohol o drogas ilícitas y el tratamiento
con inmunosupresores. A cada participante
se le tomó una muestra de sangre periférica,
utilizando EDTA como anticoagulante, para
la determinación de la carga viral de VIH-1,
las subpoblaciones de linfocitos T, el cultivo
celular y la determinación de citocinas.
Cultivo de células mononucleares
de sangre periférica
Las células mononucleares de sangre
periférica (CMSP) fueron aisladas por gra-
diente de densidad (Histopaque 1077; Sigma-
Aldrich) de las muestras de los pacientes. Las
CMSP (1 x 105 células/pozo) fueron cultiva-
das por 72 horas, a una temperatura de 37°C
y un ambiente con 5% de CO2, por triplicado
(tres pozos para cada condición), en placas
de cultivo de 96 pozos (Nunclone, Nunc), en
un volumen final de 200 μL/pozo, en medio
de cultivo RPMI completo (RPMI 1640, Gib-
co; tampón HEPES 10 mM, Gibco; piruvato
de sodio 1 mM, Sigma; aminoácidos no esen-
ciales 1x, Gibco; L-glutamina 2 mM, Gibco;
antibióticos: penicilina 100 U/mL, estrepto-
micina 100 mg/mL, Gibco; suero bovino fetal
10%, Gibco), en tres condiciones básicas:
• Medio: CMSP cultivadas en condicio-
nes basales, sin estimulación.
• PHA: CMSP cultivadas en presencia
del estimulador policlonal fitohemaglu-
tinina (PHA, Sigma, 5 μg/mL)
• SATg: CMSP cultivadas en presencia
de extracto de antígenos solubles de ta-
quizoítos de T. gondii (SATg, provisto por
Belkisyolé Alarcón de Noya, Instituto de
Medicina Tropical, Universidad Central
de Venezuela, Caracas; 1 μg/mL). A las
72 horas de cultivo los sobrenadantes
se recolectaron y almacenaron a -80°C,
para ser posteriormente utilizados en la
determinación de citocinas.
Determinación de citocinas
La concentración de IL-2, IL-10, TNF-α
e IFN-γ en los sobrenadantes de cultivo se de-
terminó por citometría de flujo (citómetro
FACScalibur, Becton Dickinson) utilizando
un estuche comercial (Human Th1/Th2 Cyto-
kine, Cytometric Bead Array, Becton-Dickin-
son), siguiendo las instrucciones del fabrican-
222 Escobar-Guevara y col.
Investigación Clínica 63(3): 2022
te. Brevemente, los sobrenadantes de cultivo
se incubaron simultáneamente con varias po-
blaciones de microperlas. Cada población de
microperlas tenía una intensidad de fluores-
cencia particular, la cual podía evidenciarse
con el detector FL3 del citómetro, y tenía en
su superficie anticuerpos específicos para una
de las citocinas (IL-2, IL-10, TNF-α o IFN-γ),
de manera que podía “atrapar” dicha citoci-
na del sobrenadante. Simultáneamente, las
muestras fueron incubadas con anticuerpos
detectores conjugados con ficoeritrina (PE),
que eran específicos para cada una de las dis-
tintas citocinas y podían formar complejos o
“sándwiches” con las citocinas unidas a las
microperlas. La intensidad de fluorescencia
de la PE medida en el detector FL2 del citó-
metro revelaba cuánta citocina se había unido
a cada población de microperlas y, utilizando
curvas de calibración, era posible conocer la
concentración en las muestras.
Análisis estadístico
Para analizar los datos se utilizó el pro-
grama SigmaStat® (Jandel Scientific). Para
estudiar las diferencias entre los grupos se
utilizaron las pruebas T de Student o U de
Mann-Whitney, según fuese apropiado. El co-
eficiente de Pearson se utilizó para analizar
la correlación entre las variables. Las prue-
bas se consideraron estadísticamente signi-
ficativas para valores de p<0,05.
RESULTADOS
Producción de IL-2: Cuando las CMSP
del grupo C2 (individuos con serología positi-
va para T. gondii, y negativa para VIH-1) fueron
estimuladas durante 72 horas con antígenos
de T. gondii (SATg), produjeron más IL-2 que
cualquier otro grupo (Tablas 1 y 2), con dife-
rencias estadísticamente significativas cuan-
do se compararon con la producción de las
mismas células cultivadas sin estimulación
(p=0,001) (Fig. 1A, SATg vs. Medio). Por otra
parte, la producción de IL-2 por las CMSP de
los pacientes P2 (individuos con serología po-
sitiva para T. gondii y VIH-1) estimuladas con
SATg, fue significativamente menor que la
del grupo C2, tanto en las etapas tempranas
(p=0,006) como en las tardías (p<0,001)
(Fig. 1A, SATg). Ningún grupo incrementó su
producción de IL-2 cuando las CMSP fueron
cultivadas por 72 horas en presencia de PHA
(Fig. 1A, PHA vs. Medio).
Producción de IL-10: La estimulación
con PHA indujo una producción significati-
vamente mayor de IL-10 en todos los grupos,
al comparar con los cultivos no estimulados
(p≤0,029) (Fig. 1B, PHA vs. Medio). Cuan-
do las CMSP de los grupos C2 y P1A fueron
cultivadas en presencia de SATg, produjeron
cantidades significativamente mayores de
IL-10 que el grupo C1 (p=0,040 y p=0,016,
respectivamente) (Fig. 1B, SATg) y que sus
respectivos cultivos en Medio (p=0,001 y
p=0,029, respectivamente) (Fig. 1B, SATg
vs. Medio). P2B/C, bajo estimulación con
SATg, produjo una cantidad significativa-
mente mayor de IL-10 que en cultivos no
estimulados (p=0,009) (Fig. 1B, SATg vs.
Medio). P1B/C evidenció producción espon-
tánea de IL-10 en cultivos no estimulados,
con valores significativamente mayores que
P1A y C1 (p=0,024 y p=0,042, respectiva-
mente) (Fig. 1B, Medio).
Producción de TNF-α: Bajo estimula-
ción con PHA, todos los grupos produjeron
una cantidad significativamente mayor de
TNF-α que los cultivos en Medio (p≤0,032)
(Fig. 1C, PHA vs. Medio), pero la producción
de los pacientes (P1 y P2), en esta condición
de estimulación policlonal, fue significativa-
mente mayor que la de los grupos control
(C1 y C2, respectivamente; p≤0,029) (Fig.
1C, PHA). C2, bajo estimulación con SATg,
produjo una cantidad significativamente
mayor de TNF-α que C1 (p=0,004) (Fig. 1C,
SATg) y que su respectivo cultivo en Medio
(p=0,001) (Fig. 1C, SATg vs. Medio). Tam-
bién, bajo estimulación con SATg, los dos
grupos de pacientes P2 produjeron más
TNF-α que los cultivos en Medio (significa-
tivo para P2B/C; p=0,006) (Fig. 1C, SATg
vs. Medio) pero menos que C2 (significativo
para P2A; p=0,041) (Fig. 1C, SATg).
Respuesta anti-T. gondii en pacientes co-infectados con VIH-1 223
Vol. 63(3): 218 - 234, 2022
Tabla 1
Determinación de Citocinas
C1 IL-2 (pg/mL)aIL-10 (pg/mL)aTNF-α (pg/mL)aIFN-γ (pg/mL)a
MediobPHAcSTAgdMedio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
C1.1 26 23 35 9 36 3 5 2 43 51 25
C1.2 17 32 18 354 7 12 23 10821 43
C1.3 16 23 17 3 486 3 2 8 3 29 48 36
C1.4 17 18 19 9 750 9 3 8 2 27 41 36
C1.5 16 15 59 6 906 16 4 108 20 18 9047
C2 IL-2 (pg/mL) IL-10 (pg/mL) TNF-α (pg/mL) IFN-γ (pg/mL)
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
C2.1 14 11 196 4 1661 60 2 214 422 28 37819e41280e
C2.2 13 11 143 3 750 32 3 49 82 38 8074 16263
C2.3 18 17 38 10 498 28 3 68 50 39 1483 3242
C2.4 19 19 188 3 1185 35 3 61 460 32 2391 37520e
C2.5 22 16 98 10 800 49 6 473 54
C2.6 18 16 57 25 1064 40 4 75 23 326
C2.7 17 26 32 914 101 17 92 74225e37918e
C2.8 18 22 24 527 286
C2.9 25 20 20
P1A IL-2 (pg/mL) IL-10 (pg/mL) TNF-α (pg/mL) IFN-γ (pg/mL)
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
P1A.1 18 28 16 18 208 35 3 757 3 31 5556 33
P1A.2 14 18 15
P1A.3 19 15 19 3 2384 63 3 831 4 31 34044e37
P1A.4 20 17 20 13 1762 73 3 1100 7 39 34776e54
P1A.5 18 18 20 4 631 43 2 1441 21 33 25029e46
P1B/C IL-2 (pg/mL) IL-10 (pg/mL) TNF-α (pg/mL) IFN-γ (pg/mL)
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
P1B/C.1 18 18 17 19 2514 162 3 767 6 29 20010e42
P1B/C.2 19 19 17 105 1244 127 4 2310 4 33 22243e35
P1B/C.3 22 23 18 137 1984 20 36 1687 8 58 54711e45
P1B/C.4 17 23 16 6 344 7 5 411 7 33 10341 38
P1B/C.5 18 20 18 249 594 379 13 1134 33 35 7440 23
P1B/C.6 20 22 21 32 1618 167 5 316 7 56 769 48
P1B/C.7 16 19 15
P1B/C.8 17 17 75 623 12 334 39
224 Escobar-Guevara y col.
Investigación Clínica 63(3): 2022
P2A IL-2 (pg/mL) IL-10 (pg/mL) TNF-α (pg/mL) IFN-γ (pg/mL)
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
P2A.1 12 13 12 6 2787 14 7 943 4 41 8666 43
P2A.2 13 16 21
P2A.3 21 21 24 5 780 10 8 580 62 110 50854e
P2A.4 22 21 21 5 1051 8 5 1274 7 43 3766 68
P2A.5 15 25 20 24 791 40 8 1163 18 37 71385e277
P2A.6 11 68 18 6 3428 185 2 3123 6 30 31280e42
P2A.7 21 18 23 17 187 17 58 27951e1964
P2A.8 17 22 21 34 182 142 20 884 135 18 11292 107
P2B/C IL-2 (pg/mL) IL-10 (pg/mL) TNF-α (pg/mL) IFN-γ (pg/mL)
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
P2B/C.1 12 12 12 8 1929 80 39 33603e102
P2B/C.2 20 19 20 3 1478 42 3 2364 10 31 35101e45
P2B/C.3 16 20 15 46 180 68 42 1335 94 36 20398e199
P2B/C.4 14 12 15 27 227 68 43 31413e65
P2B/C.5 19 15 27 5 507 11 4 203 206 24 32945e
P2B/C.6 18 18 21 9 824 17 2 52 4 37 39
P2B/C.7 17 19 18 11 473 129 6 874 76 40 12347 53
P2B/C.8 15 12 13 49 427 32 31 469 6 69 1436 21
P2B/C.9 17 13 17 38 668 171 10 3130 146 44 37327e1089
P2B/C.10 19 37 23 28 459 84
P2B/C.11 18 21 18 39 1030 235 3 531 8 35 12381 61
P2B/C.12 19 20 24 16 231 22 5 1809 66 31 5201 887
P2B/C.13 18 19 21 16 1560 334 3 859 234 24 10802 774
aLas concentraciones de IL-2, IL-10, TNF-α e IFN-γ se determinaron en el sobrenadante de los cultivos.
bMedio: CMSP cultivadas por 72 horas en condiciones basales, sin estimulación.
cPHA: CMSP cultivadas por 72 horas en presencia de fitohemaglutinina (5 μg/mL).
dSATg: CMSP cultivadas por 72 horas en presencia de antígenos solubles de taquizoítos de T. gondii (1 μg/mL).
eLas concentraciones de IFN-γ mayores a 20.000 pg/mL se consideran más allá del rango de la curva de calibración.
Tabla 1. CONTINUACIÓN
Respuesta anti-T. gondii en pacientes co-infectados con VIH-1 225
Vol. 63(3): 218 - 234, 2022
Tabla 2
Producción de Citocinas – Dispersión de valores.
C1 IL-2 IL-10 TNF-αIFN-γ
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
Medianaa17 23 19 7 618 13 3 8 3 27 52 36
25%a16 17 18 5 420 6 3 6 2 22 47 31
75%a19 25 41 9 829 26 5 58 14 32 9491 40
nb5 5 5 4 4 4 5 4 5 5 5 4
C2 IL-2 IL-10 TNF-αIFN-γ
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
Mediana 18 17 58 7 914 41 3 75 82 35 5233 37520
25% 16 15 30 3 763 33 3 63 51 28 1484 13008
75% 19 21 155 11 1155 57 6 408 388 39 37819 38759
n 9 9 9 6 7 7 7 7 7 6 6 5
P1A IL-2 IL-10 TNF-αIFN-γ
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
Mediana 18 18 19 8 1196 53 3 966 5 32 29536 42
25% 17 17 16 3 419 39 2 794 3 31 15293 35
75% 19 21 20 16 2073 68 3 1271 14 36 34410 50
n 5 5 5 4 4 4 4 4 4 4 4 4
P1B/C IL-2 IL-10 TNF-αIFN-γ
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
Mediana 18 19 17 75 1244 144 5 767 7 35 15176 40
25% 17 18 17 22 602 20 4 353 6 33 7440 35
75% 19 22 18 129 1893 167 13 1549 8 52 22243 45
n 8 8 7 7 7 6 7 7 6 7 6 6
P2A IL-2 IL-10 TNF-αIFN-γ
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
Mediana 16 21 21 6 791 17 7 1053 13 41 27952 88
25% 13 17 19 5 335 11 5 884 6 32 9323 43
75% 21 24 22 22 2353 116 8 1274 62 54 45960 277
n 8 8 8 7 7 7 6 6 6 7 7 6
P2B/C IL-2 IL-10 TNF-αIFN-γ
Medio PHA STAg Medio PHA SATg Medio PHA SATg Medio PHA SATg
Mediana 18 19 18 22 490 68 5 874 76 37 20398 65
25% 16 13 15 10 329 27 3 484 9 31 11189 47
75% 19 20 21 39 927 150 9 1899 133 41 33439 630
n 13 13 13 12 12 12 11 11 11 12 11 11
aLos valores de mediana, percentil 25 y percentil 75 están expresados en pg/mL.
bn=número de pacientes en cada grupo analizado.
226 Escobar-Guevara y col.
Investigación Clínica 63(3): 2022
A
IL-10 (pg/mL)
0
40
80
120
160
200
240
280
320
500
1000
1500
2000
2500
3000
C1 (n=4)
P1A (n=4)
P1B/C (n=7)
C2 (n=7)
P2A (n=7)
P2B/C (n=12)
Medio PHA SATg
∗
∗
∗
∗
#
##
#
#
#
##
#
∗
: p<0,05
#: p<0,05 (vs. Medio)
B
TNF-α (pg/mL)
0
3
6
9
12
15
18
21
300
600
900
1200
1500
1800
2100
2400
2700
3000 C1
(n=5)
P1A
(n=4)
P1B/C
(n=7)
C2
(n=7)
P2A
(n=6)
P2B/C
(n=11)
Medio PHA SATg
∗
∗
#
#
#
#
#
∗
: p<0.05
#: p<0.05 (vs Medio)
#
∗
∗
##
∗∗
C
IFN-γ (pg/mL)
0
30
60
90
6000
12000
18000
24000
30000
36000
42000
48000 C1
(n=5)
P1A (
n=4)
P1B/C
(n=6)
C2
(n=6)
P2A
(n=7)
P2B/C
(n=11)
Medio PHA SATg
∗
∗#
#
#
##
∗: p<0,05
#: p<0,05 (vs. Medium)
#
∗
#
#
∗
∗
#
D
Fig. 1. Producción de Citocinas: Se representan las medianas (líneas horizontales), los percentiles 5 y 95 (cajas) y las líneas de error de las concentraciones
(pg/mL) de IL-2 (A), IL-10 (B), TNF-α (C) e IFN-γ (D) en los sobrenadantes de cultivos de CMSP de individuos no infectados con VIH-1 con serología
negativa (C1) o positiva (C2) para T. gondii; y de pacientes infectados con VIH-1, con serología negativa (P1) o positiva (P2) para T. gondii. Los pacien-
tes (P1 y P2) se agruparon de acuerdo a su recuento de linfocitos T CD4+ en sangre periférica, en tempranos/asintomáticos (>350 células/μL: P1A y
P2A) o tardíos/sintomáticos (<350 células/μL: P1B/C y P2B/C). Las CMSP fueron cultivadas por 72 horas en condiciones basales/sin estimulación
(Medio), en presencia del estimulador policlonal fitohemaglutinina (PHA, 5 μg/mL) o en presencia de antígenos solubles de taquizoítos de T. gondii
(SATg, 1 μg/mL). Los asteriscos representan diferencias estadísticamente significativas entre los grupos, el símbolo de número representa diferencias
estadísticamente significativas entre un grupo en una condición determinada y su respectivo cultivo control sin estimulación (Medio).
Respuesta anti-T. gondii en pacientes co-infectados con VIH-1 227
Vol. 63(3): 218 - 234, 2022
Producción de IFN-γ: La estimulación
con PHA indujo una producción significati-
vamente mayor de IFN-γ en todos los gru-
pos, al comparar con la condición Medio
(p≤0,029) (Fig. 1D, PHA vs. Medio). Bajo
estimulación con SATg, los grupos C2, P2A
y P2B/C produjeron una cantidad signifi-
cativamente mayor de IFN-γ que en Medio
(p=0,004, p=0,026 y p=0,006, respectiva-
mente) (Fig. 1D, SATg vs. Medio), y mayor
que sus respectivos grupos C1, P1A y P1B/C,
también bajo estimulación con SATg (sig-
nificativo para C2 vs. C1: p=0,016; y para
P2B/C vs. P1B/C: p=0,024) (Fig. 1D, SATg).
Sin embargo, los pacientes P2A y P2B/C pro-
dujeron cantidades significativamente me-
nores de IFN-γ que el grupo C2, en cultivos
estimulados con SATg (p=0,004 y p=0,002,
respectivamente) (Fig. 1D, SATg).
Correlaciones entre las producciones
de citocinas: Cuando la producción de ci-
tocinas en respuesta a los antígenos de T.
gondii (SATg) se analizó en los grupos de in-
dividuos seropositivos para el parásito (C2 y
P2), se encontraron correlaciones positivas
(Coeficiente de Pearson), estadísticamente
significativas, entre la producción de IFN-γ y
la producción de IL-2 (p<0,001, n=25; Fig.
2A), entre la producción de TNF-α y la pro-
ducción de IL-2 (p<0,001, n=23; Fig. 2B), y
entre la producción de TNF-α y la producción
de IFN-γ (p<0,001, n=20; Fig. 2C).
DISCUSIÓN
Los individuos inmunocompetentes
son capaces de controlar la infección por
T. gondii induciendo una respuesta inmuni-
taria celular temprana y fuerte30-32. En esta
respuesta el IFN-γ es el principal mediador
de resistencia del hospedador13, al estimular
la expresión de diferentes moléculas efecto-
ras, tales como las trifosfatasas de guanosi-
na inducibles por IFN (GTPasas), la sintasa
inducible de óxido nítrico (iNOS) y la indo-
lamina-2,3-dioxigenasa (IDO)33, 34, las cuales
conducen a vigorosas respuestas inmunita-
rias celulares autónomas35, 36, con supresión
del crecimiento y/o muerte del parásito
dentro de las células infectadas33-36. El TNF-α
también juega un papel fundamental en la
respuesta protectora, particularmente en el
cerebro14, 15, 37-39, al disminuir la entrada del
parásito a las células, detener su prolifera-
ción e inducir su muerte. La IL-10, por su
parte, ejerce un efecto regulador, al prevenir
la inmunopatología potencialmente letal22,
23, 31. Así pues, el perfil de citocinas produci-
do en respuesta a T. gondii, es crítico para lo-
grar un control efectivo de la infección, pero
sin causar daños al propio hospedador30-32.
En los experimentos descritos en este traba-
jo, los individuos seropositivos para T. gon-
dii, pero seronegativos para VIH-1, produje-
ron cantidades significativamente mayores
de IFN-γ, TNF-α e IL-10 en respuesta a los
antígenos parasitarios, que los individuos se-
ronegativos para T. gondii y VIH-1. Por lo tan-
to, la producción de IFN-γ, TNF-α e IL-10, de
acuerdo a los métodos aquí descritos, permi-
te claramente distinguir entre la respuesta
inmunitaria contra T. gondii de individuos
asintomáticos seropositivos para este parási-
to y la de individuos seronegativos.
Por su parte, la IL-2 es importante para
la función y regulación de los linfocitos T21,
40, 41 y su producción bajo estimulación con
SATg, presentó correlaciones positivas con
las producciones de IFN-γ y de TNF-α en los
individuos seropositivos para T. gondii. Sin
embargo, los pacientes infectados con VIH-
1 y serología positiva para T. gondii, desde
etapas tempranas/asintomáticas, produje-
ron cantidades significativamente menores
de IL-2, TNF-α e IFN-γ en respuesta a los
antígenos parasitarios que las del grupo se-
ropositivo para T. gondii, pero seronegativos
para VIH-1, lo cual relaciona a la infección
por VIH-1 con alteraciones tempranas (ade-
más de las ya descritas en etapas avanzadas)
en la respuesta contra T. gondii. Estas alte-
raciones tempranas podrían comprometer la
capacidad de control de la infección laten-
te13-18, 37-39, aumentando el riesgo de reacti-
vación de la replicación parasitaria, aunque
fuese de manera limitada42, 43, es decir, no