https://doi.org/10.52973/rcfcv-e33202
Recibido: 04/12/2022 Aceptado: 30/01/2023 Publicado: 26/02/2023
1 de 7
Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, rcfcv-e33202, 1 - 7
RESUMEN
El experimento tuvo dos fases, la primera determinó la relación entre
el recuento de folículos antrales (RFA) y la concentración de la hormona
anti-mülleriana (AMH) valorada el día de reinicio de la onda folicular
en 61 vaquillas Holstein mestizas, criadas en ganaderías del trópico
alto del Ecuador. La segunda fase comparó el RFA valorado el día
de la aspiración ecoguiada (OPU); así como, la cantidad y calidad
de los complejos cumulus ovocito (COCs) recuperados en animales
con alta (n=8) y baja (n=8) concentración de AMH. La sincronización
de la onda folicular en la primera fase se realizó con benzoato de
estradiol más un implante de progesterona intravaginal (DIV) y
prostaglandina (PG). El RFA y la toma de las muestras de sangre en
la primera fase del experimento se realizó el día 11 del protocolo. Se
establecieron valores de corte de AMH mayores a 0,12 ng·mL
-1
para
el grupo de alta y de 0,05ng·mL
-1
para el grupo de baja concentración
de AMH. La concentración de AMH el día 0 (inicio de la onda folicular)
fue de 0,13 ± 0,01 ng·mL
-1
, con un RFA de 17,31 ± 0,69 folículos y una
correlación alta y positiva entre la AMH y el RFA de r=0,93; P<0,001.
En la segunda fase del experimento se observó que las vaquillas
con alta concentración de AMH presentaron el doble de folículos y
COCs comparadas con las de baja concentración; sin embargo, el
porcentaje de recuperación fue similar (57 %) en los dos grupos. Se
raticó la existencia de una correlación alta y positiva entre el RFA y
la concentración de la AMH; además, se observó una relación fuerte
entre la AMH y la cantidad y calidad de COCs recuperados por OPU.
Vaquillas con más de 12 ng·mL
-1
deberían ser seleccionadas como
donadoras de ovocitos, pues proporcionaron el doble de COCs aptos
para la producción de embriones in vitro (PIVE), lo cual inuirá en la
cantidad y calidad de embriones obtenidos al nal de la PIVE.
Palabras clave: Hormona anti-mülleriana; vaquillas; Holstein;
trópico alto; folículos
ABSTRACT
The experiment had two phases, the first one determined the
relationship between the antral follicle count (AFC) and the
concentration of Anti-Müllerian hormone (AMH) valued on the day the
follicular wave restarted in 61 crossbred Holstein heifers, raised on
farms, from the high tropics of Ecuador. The second phase compared
the AFC assessed on the day of ultrasound-guided aspiration (OPU); as
well as the quantity and quality of Cumulus Oocyte Complexes (COCs)
recovered in animals with high (n=8) and low (n=8) concentrations of
AMH. Follicular wave synchronization in the rst phase of the study was
performed with estradiol benzoate plus an intravaginal progesterone
(IVD) and prostaglandin (PG) implant. The AFC and the taking of the
blood samples in the rst phase of the experiment were carried out on
day 11 of the protocol. AMH cut-off values of greater than 0.12 ng·mL
-1
were established for the high AMH group and 0.05 ng·mL
-1
for the low
AMH concentration group. The AMH concentration on day 0 (start of the
follicular wave) was 0.13 ± 0.01 ng·mL
-1
, with an AFC of 17.31 ± 0.69 follicles
and a high and positive correlation between AMH and the AFC of r=0.93;
P<0.001. In the second phase of the experiment, it was observed that
the heifers with a high concentration of AMH had double the number
of follicles and COCs compared to those with a low concentration;
however, the recovery rate was similar (57 %) in the two groups. The
existence of a high and positive correlation between AFC and AMH
concentration was conrmed; Furthermore, a strong relationship was
observed between AMH and the quantity and quality of COCs recovered
by OPU. Heifers with greater than 12 ng·mL
-1
should be selected as
oocyte donors, since they provided double the COC's suitable for the
production of embryos in vitro (PIVE), which will inuence the quantity
and quality of embryos obtained at the end of the PIVE.
Key words: Anti-müllerian hormone; heifers; Holstein; high tropics;
follicles
Relación de la hormona anti-mülleriana con la cantidad y calidad de
ovocitos colectados por aspiración ecoguiada en vaquillas Holstein
Relationship of anti-müllerian hormone with the quantity and quality of oocytes collected by
ultrasound-guided aspiration in Holstein heifers
Jorge Dután
1,2
, Jorge Samaniego
1
, Fernando Perea
3
, Hugo Hernández-Fonseca
4
, José Luis Pesántez
1
, Andrés Jácome
1
,
Gabriela Garay
1
y Luis Ayala
1
*
1
Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Agropecuarias. Cuenca, Ecuador.
2
Universidad del Zulia, Facultad de Ciencias Veterinarias, Doctorado en Ciencias Veterinarias. Maracaibo, Venezuela.
3
Universidad de Los Andes, Departamento de Ciencias Agrarias.Trujillo, Venezuela.
4
St. George's University, School of Veterinary Medicine, Anatomy, Physiology and Pharmacology Departament. St. George´s, Granada.
*Autor para correspondencia: luis.ayala@ucuenca.edu.ec
Relación de la AMH con la recuperación de ovocitos por OPU / Dután y col. ________________________________________________________
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INTRODUCCIÓN
Las condiciones medioambientales del trópico alto del Ecuador
(2.500 metros sobre el nivel del mar –msnm–) y la adaptación que han
logrado los bovinos de genotipo Holstein mestizos en esta región, han
provocado cambios en su siología ovárica [3, 5]. Característica que
podaría alterar la relación entre la concentración de la hormona anti-
mülleriana (AMH) y el recuento de folículos antrales (RFA) descritos en
condiciones diferentes [28] como en el trópico húmedo [6], seco [1]
y en regiones con cuatro estaciones [16], tanto en Bos indicus [25],
como en Bos taurus [27]. Particularidad que pone en duda la utilización
de los puntos de corte de la AMH existentes hasta el momento, para la
selección de animales con alto RFA requeridos para la producción de
embriones, mediante las técnicas combinadas de aspiración folicular
ecoguiada (OPU) y la producción in vitro de embriones (PIVE) [6].
La hipótesis se fortalece ya que en pisos altitudinales elevados
(sobre los 2.500 msnm) se produce hipoxia hipobárica, la cual afecta la
función del eje hipotálamo-hipósis-ovario, generando problemas en
la esteroidogénesis, esto inuye a su vez en el número y crecimiento
de los folículos disponibles en los ovarios de los ovinos [18]. Y si
bien, no existe información en la especie bovina sobre el efecto de
la hipoxia, se ha descrito cambios en la siología ovárica del bovino
Criollo en la sierra del Ecuador, incluyendo disminución en el RFA
precisamente en regiones semejantes a las del presente estudio
[3]. Un menor RFA provocaría disminución en la concentración de
AMH en estos animales, esto debido a que la AMH es producida
especícamente por las células de la granulosa de folículos pequeños
en crecimiento [14], por lo tanto, animales con menor cantidad de
folículos antrales (FA) presentarán menor concentración de AMH.
Además, se ha descrito que terneras nacidas de madres con
restricción nutricional del 60 % en los primeros 110 días de gestación,
presentaron un RFA (15,8 ± 1,8 folículos), y una concentraciones de AMH
menor a la observada en crías de madres sobrealimentadas con un
120 % del requerimiento nutricional (23,6 ± 1,9 folículos) [15]. En efecto,
una nutrición deciente en las madres impacta negativamente sobre
el RFA y los niveles de AMH en su descendencia [19]. En este contexto,
es importante considerar que el valor energético de los pastos en el
trópico alto es reducido, lo cual afectaría el RFA en estos animales [22].
Por lo tanto, se considera que los valores de corte de la AMH y su
relación con el RFA, el número y calidad de COCs recuperados por la
técnica de OPU en vaquillas de genotipo Holstein mestizo, criadas
bajo condiciones climáticas de trópico alto y alimentadas al pastoreo
podría ser diferente a los determinados para esta raza en condiciones
de manejo y ambientales diferentes.
En consecuencia, se plantearon dos objetivos: (1) determinar si
las vaquillas de genotipo Holstein mestizas criadas sobre los 2.500
msnm presentan correlación positiva entre el recuento de folículos
antrales (RFA) y la concentración de la hormona anti-mülleriana (AMH)
valorada el día de reinicio de la onda folicular. (2) comparar el número
de folículos disponibles en los ovarios el día de la OPU; así como, la
cantidad y calidad de COCs recuperados en vaquillas con alta y baja
concentración de AMH.
MATERIALES Y MÉTODOS
Animales y granja
El estudio se realizó en 12 ganaderías comerciales, ubicadas en
la región centro sur del Ecuador (sobre los 2.500 msnm). Estas se
encontraban en agroecosistemas con temperaturas entre 7 a 18 °C, 80 %
de humedad relativa, pluviosidad anual de 800 a 2.000 milímetros (mm).
Los hatos poseían un sistema de manejo extensivo controlado mediante
cerca eléctrica (Electricador B/12, GEMI 39, Electrónica, Francia),
alimentación a base de pasturas mezcla de gramíneas (Pennisetum
clandestinum y Lolium multiorum), leguminosas (Trifolium pratense,
Trifolium repens), concentrado comercial y sales minerales.
Se seleccionaron 61 vaquillas de genotipo Holstein mestizo de
carácter lechero (cruce entre Holstein y Criollo), peso promedio
de 394,9 ± 1,9 kilogramos (kg), condición corporal (CC) de 2,6 ± 0,03,
escala de 1–5, según lo descrito por Song y col. [26], y edad media de
19,9 ± 0,18 meses. Este estudio se realizó cumpliendo la normativa del
código sanitario para animales terrestres, capítulo 7.8 “Utilización de
animales en la investigación y educación”, de la Organización Mundial
de Sanidad Animal (OIE) [17].
Diseño experimental
El experimento fue dividido en dos fases, en la primera se determinó
la relación y asociación existente entre la AMH y el RFA en un momento
determinado del ciclo estral (inicio de onda folicular) luego de aplicar
un protocolo de sincronización del celo (FIG. 1).
Las 61 vaquillas en estudio fueron agrupadas en animales con alta,
media y baja concentración de AMH, y en base a esta clasicación
se determinó el número de folículos antrales (RFA) en cada uno de
los grupos.
En la segunda fase se seleccionaron 8 vaquillas con alta concentración
(Tratamiento 1 –T1–) y 8 con baja concentración de AMH (Tratamiento 2
–T2–) del total de los 61 animales valorados en el experimento 1. A cada
grupo experimental se les realizaron 4 sesiones OPU.
Determinación de la concentración plasmática de la hormona anti-
mülleriana (AMH)
En la mañana del día 11 del protocolo (FIG. 1) se colectó una muestra
sanguínea en tubos al vacío con ácido etilenodiaminatetraacético
(EDTA, Vacutainer®), mediante punción de la vena coccígea.
Inmediatamente las muestras fueron centrifugadas (Hettich, Micro
200, Alemania) a 3.000 gravedades (G) por 10 minutos (min) y el plasma
obtenido se retiró y almacenó en alícuotas a -20 °C (Refrigeradora
INDURAMA RI 405 CR, Ecuador), hasta el posterior análisis de la AMH.
La concentración plasmática de AMH fue determinada mediante el kit
ELISA, (kit DL–AMH–b, Develop®, China), siguiendo las instrucciones
del fabricante. Brevemente, la prueba se basó en la intensidad del
color a una longitud de onda de 450 nanómetros (nm). El kit de acuerdo
FIGURA 1. Protocolo de valoración de la concentración de hormona
anti-mülleriana y recuento de folículos antrales. BE: benzoato
de estradiol 2 miligramos (mg). DIP: dispositivo intravaginal de
liberación de progesterona –P4– (1,9 g). PG: prostaglandina (25 mg).
US: ecografía. FPO: folículo preovulatorio. MS: toma de muestra de
sangre. RFA: recuento de folículos antrales < 4 mm
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con el fabricante presentó una sensibilidad del ensayo inferior a 0,117
nanogramos·mililitro
-1
(ng·mL
-1
).
Formación de grupos de alta, media y baja concentración de AMH
Una vez determinada la concentración plasmática de AMH de cada
una de las 61 vaquillas en estudio, éstas fueron divididas en tres
grupos en base a la concentración de AMH: grupo de alto nivel de
AMH (> 0,12 ng·mL
-1
; n=16), grupo con nivel medio de AMH (0,06 – 0,12
ng·mL
-1
; n=25) y grupo de bajo nivel de AMH (< 0,05 ng·mL
-1
; n=20), de
acuerdo a la metodología descrita por Ribeiro y col. [19]; Souza y col.
[27], quienes realizaron terciles con la nalidad de que los animales
de alta y baja concentración de AMH quedaran separadas por los
animales con características combinadas del grupo clasicado como
de nivel medio de AMH.
Sesiones de OPU
Se evaluaron 8 vaquillas con alto (0,31 ± 0,009 ng·mL
-1
; T1) y 8 con
nivel bajo (0,04 ± 0,001 ng·mL
-1
; T2) niveles de AMH. A cada vaquilla
de T1 y T2 se aplicó 4 sesiones de OPU.
Para sincronizar la onda folicular antes de la primera sesión de OPU,
se realizó ablación de todos los folículos mayores a 5 mm en los dos
ovarios de las vaquillas; las sesiones de OPU se realizaron cada 96
horas (h) a partir de este momento.
Preparación de las vaquillas para las sesiones de OPU
Los animales fueron colocados en una manga (Brete PLUS, Ecuador)
cumpliendo las normas de bioseguridad, tanto del operador como
del animal. La parte posterior de la vaquilla fue lavada con agua y
amonio cuaternario al 10 %. Luego se aplicó por vía epidural (última
sacra y primera coccígea) una mezcla de lidocaína al 2 % (Roxicaina®)
y xilacina al 2 % (Dormi-xyl®).
Valoración y aspiración de los folículos disponibles en cada sesión
de OPU
Los ovarios se visualizaron mediante ecografía (Prosound 2, Aloka,
Japón) y se contaron todos los folículos con diámetro entre 4 y 8
mm. Luego se procedió a la aspiración transvaginal de los folículos
utilizando un escáner de ultrasonido portátil (Prosound 2, Aloka,
Japón), equipado con un transductor sectorial de 5 megahertz (MHz)
ensamblado en un soporte de sonda. Para la punción se utilizó una
aguja hipodérmica desechable (1,2 × 75 mm) conectada en un extremo
a un tubo cónico de 50 mL y el otro a una bomba de vacío (WTA BV
003D, Brasil) con una presión regulada a 70 mm de mercurio (mm·Hg).
Se usó solución salina tamponada con fosfato (PBS) suplementada
con 0,06 miligramos (mg)·mL
-1
de penicilina (mg·mL
-1
) y heparina 10
unidades internacionales (UI) como medio de recolección de COCs,
que se mantuvo a 37 °C mientras se realizaba la OPU.
Inmediatamente después de cada sesión de OPU, el contenido del
tubo fue depurado en un ltro EmCon (Zona™ Agtech, EUA) y luego
transferido a una placa Petri. La búsqueda y clasicación de los COCs
se realizó en un estereoscopio (SMZ 745, Nikon, Japón), en base a los
criterios previamente descritos [9]. Brevemente, COCs de calidad
A: apariencia compacta, con múltiples capas (mas de 4 capas) de
células de cumulus, citoplasma granular uniforme y transparente;
calidad B: con 1 a 3 capas de células del cumulus que cubrían la zona
pelúcida, con citoplasma opaco, total o parcialmente homogéneo
y namente granulado; calidad C: parcial o totalmente denudados,
citoplasma con áreas oscuras irregulares; calidad D: células del
cumulus completamente expandidas y decoloradas. Finalmente, los
COCs fueron agrupados en aptos (calidad A y B) y no aptos (calidad
C y D) según lo descrito por Ayala y col. [4].
Análisis estadistico
Los datos fueron tabulados en Excel y el análisis estadístico se
realizó mediante el programa estadístico SPSS® versión 25 [13].
La concentración de la hormona anti-mülleriana de las 61 vaquillas
se expresó en medias y desviación estándar, así como sus valores
mínimos y máximos. Para determinar la correlación entre el RFA y
la AMH se utilizó la prueba de Pearson; además, se aplicó regresión
lineal simple entre estas dos variables. Para comparar el número de
folículos observados, ovocitos colectados y su calidad, primero se
clasicó los ovocitos en aptos y no aptos dentro de cada uno de los
tratamientos (T1=alta y T2=baja concentración de AMH), y a estos
resultados obtenidos se aplicó la prueba de T de Student.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La concentración plasmática media de la AMH en el día de reinicio
de la onda folicular (día 0) fue de 0,13 ± 0,01 ng·mL
-1
, con un valor
mínimo de 0,03 y máximo de 0,40 ng·mL
-1
(TABLA I). El valor plasmático
de AMH reportado en el presente trabajo fue menor al descrito por
Baldrighi y col. [5], quienes establecieron una concentración de 0,24
ng·mL
-1
para vaquillas Holstein criadas en condiciones de trópico bajo.
Sin embargo, otros autores reportan concentración aún más altas de
AMH (0,3 ± 0,03 ng·mL
-1
) en las mismas condiciones tropicales [12].
En el presente estudio se determinó una media de 17,31 ± 0,69 folículos
(rango 9-29 folículos; TABLA I), cuyos valores máximos fueron menores a
TABLA I
Valores descriptivos de los niveles de la hormona anti-mülleriana, del recuento de folículos
antrales, y algunas características de las en vaquillas Holstein mestizas del estudio
Variable N X DE Mínimo Máximo
Hormona anti-mülleriana (ng·mL
-1
) 61 0,13 0,11 0,03 0,40
Recuento de folículos antrales (n) 61 17,31 5,36 9,00 29,00
Condición corporal (1-5) 61 2,64 0,26 2,25 3,00
Peso (kg) 61 394,9 15,4 350,00 425,00
Edad (meses) 61 19,95 1,38 17,00 24,00
N=número de vacas. X= valor medio. DE=desviación estándar
FIGURA 2. Asociación entre los niveles plasmáticos de la hormona
anti-mülleriana (AMH) con el recuento de folículos antrales (RFA)
en vaquillas Holstein mestizas
FIGURA 3. Recuento de folículos antrales (Panel A) y niveles
plasmáticos de la hormona anti-mülleriana (AMH; Panel B),
valorados el día de inicio de la onda folicular en vaquillas Holstein
mestizas, clasicadas en tres grupos según el nivel de AMH en bajo,
medio y alto. *: indican diferencia estadística signicativa entre
grupos experimentales P<0,05
Relación de la AMH con la recuperación de ovocitos por OPU / Dután y col. ________________________________________________________
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los reportados por Baldrighi y col. [5] quienes establecieron un promedio
de 35,9 folículos, con valor mínimo de 18 y un valor máximo de 110 folículos
para animales de raza Holstein. A pesar de que son animales de un mismo
genotipo en los dos estudios, la diferencia en el número de FA menores
o iguales a 4 mm es el doble, lo cual afecta la concentración de AMH,
ya que esta hormona es producida especícamente en las células de la
granulosa de los folículos pre-antrales y FA pequeños en crecimiento [14].
También, se encuentra descrito que el número y crecimiento
de FA pequeños, puede verse afectado por alteraciones en las
concentraciones de hormonas metabólicas inducidos por cambios
agudos en la ingesta de nutrientes [23, 24, 29], cambios que son
recurrentes en la zona en estudio, pues el valor energético de los pastos
es reducido y variable [22]. Este sistema de alimentación al pastoreo
propio de las ganaderías de la zona, por un lado afectaría a los animales
que ingieren estas pasturas, pero además, provocarían un impacto
negativo sobre el RFA y los niveles de AMH de su descendencia [19].
A pesar de las diferencias en los valores de corte de la AMH
anteriormente analizados, se ratificó en el presente estudio la
existencia de una correlación positiva y signicativa con el número
total de FA menores o iguales a 4 mm presentes en el reinicio de la
onda folicular (r=0,93; P<0,001). Además, el 86 % de la variabilidad
promedio del RFA podría ser explicado por el modelo de regresión
lineal ajustado, mostrado en la FIG. 2 (R
2
=0,86), donde se observa que
animales con mayor población folicular al momento del reinicio de
la onda, presentaron concentraciones superiores a 0,12 ng·mL
-1
de
AMH en plasma.
Estos resultados permiten corroborar la fuerte relación entre la
AMH y el RFA establecido en la raza Holstein, descrito previamente por
Rico y col. [20], quienes observaron una relación de r=0,59 (P<0,001)
en vacas estabuladas. En animales con alimentación controlada, esta
correlación se incrementó a un valor de r=0,66; P<0,001 [5]. En bovinos
criados a nivel del mar, Gobikrushanth y col. [11] determinaron una
mayor correlación (r=0,79; P<0,001), llegando a su valor más alto en
animales estabulados y criados a nivel del mar (r=0,80; P<0,001) [6].
Previamente se encontró una correlación en vacas mestizas Holstein
de 78,3 % (P<0,0001) entre el RFA y la concentración de AMH [2].
Al agrupar los animales de acuerdo la concentración de AMH
en el presente estudio se determinó que el 32,9 % de animales
(n=20) presentaron un nivel bajo de (0,04 ± 0,002 ng·mL
-1
) AMH; el
40,9 % (n=25; medio; 0,09 ± 0,003 ng·mL
-1
) y el 26,2 % (n=16; alto;
0,31 ± 0,009ng·mL
-1
), con diferencia entre grupos (P<0,05; FIG. 3; Panel
B). Igual comportamiento fue observado en el RFA de los grupos de
bajo, medio y alto nivel de AMH (11,6 ± 0,36; 17,1 ± 0,30; 24,8 ± 0,52 folículos
respectivamente; FIG. 3; Panel A).
Las concentraciones de AMH y el RFA determinadas en el presente
trabajo fueron similares a las observadas en vaquillas de genotipo
Holstein agrupadas en animales con baja (0,06 ± 0,02 ng·mL
-1
;
13,4 ± 1,40 folículos) y alta (0,57 ± 0,26 ng·mL
-1
; 34,3 ± 3,12 folículos)
concentración de AMH [6]. En un estudio previo, esta distribución en
vacas Holstein mestizas fue de >0,20 ng·mL
-1
y un RFA de 39,61 ± 2,3
folículos en el grupo de alta concentración de AMH y en las de baja
se observaron valores de 0,06 ± 0,02 ng·mL
-1
y 13,4 ± 1,40 folículos [2].
Sin embargo, dieren de los descritos por Guerreiro y col. [12],
quienes encontraron valores de AMH superiores para el grupo de baja
concentración (0,2 ± 0,01 ng·mL
-1
) y grupo de alta (0,4 ± 0,02 ng·mL
-1
)
o los descritos por Baldrighi y col. [5] que observaron valores de
0,13 ± 0,02ng·mL
-1
(grupo de baja) y 0,54 ± 0,11 ng·mL
-1
(grupo de
alta), esta diferencia estaría relacionada con el número de folículos
observados el día de la toma de la muestra de sangre para determinar
los niveles de AMH, 24,1 ± 1,3 folículos (grupo de baja) y 68,5 ± 17,5
folículos (grupo de alta).
Si bien los valores medios en los grupos de baja y alta concentración
de AMH dieren de los estudios citados, la correlación entre el RFA
y la AMH los grupos de baja (r=0,67; P<0,001) y alta (r=0,63; P<0,01)
concentración de AMH del presente estudio muestran valores
consistentes con los observados en otros estudios.
La concentración de AMH puede utilizarse como un marcador
endócrino para seleccionar donadoras de ovocitos, que permitan
disponer de mayor cantidad de folículos disponibles para la aspiración
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Resultados de la OPU
El promedio general de FA entre 4–8 mm disponibles en el momento de
la OPU (61 sesiones) fue de 17,3 ± 0,84, con un porcentaje de recuperación
del 57,23 %, obteniendo 9,9 ± 0,57 COCs. Estos resultados son superiores a
los reportados para vaquillas de este genotipo, en condiciones de trópico
bajo, estabuladas y alimentadas con ración totalmente mezclada (14,44
folículos; 49,81 % de recuperación; 6,1 COCs) [8].
Al clasicar los animales en grupos con alta y baja concentración
de AMH se determinó que las vaquillas con alta concentración de AMH
presentaron el doble de folículos en el día de la OPU comparado con los
animales con baja concentración de AMH, aunque en los dos grupos
se obtuvieron similares porcentajes de recuperación de COCs (57 %).
Además, al contar con un mayor número de folículos en el grupo de
alta concentración de AMH se obtuvo el doble de COCs aptos para
la producción de embriones in vitro (TABLA II).
Esta diferencia en cuanto a folículos disponibles para ser aspirados
entre los grupos de alta y baja concentración de AMH, también,
fue observada en otros estudios al valorar vaquillas Holstein en
condiciones medioambientales y de manejo diferentes (trópico
bajo), en los cuales el grupo de alta AMH presentó 20,9 ± 1,5 folículos
y una recuperación media de 17,3 ± 1,5 COCs (81,8 %); mientras que el
grupo de baja AMH se observaron 13,6 ± 0,9 folículos y se obtuvieron
9,0 ± 0,9 COCs (64,7 %) [12]. Iguales resultados fueron reportados por
Ghanem y col. [10], quienes determinaron mayor disponibilidad de
folículos y COCs recuperados en el grupo de alta (20,40 ± 1,63 folículos)
comparado con el grupo de baja (12,19 ± 0,72 folículos) concentración
de AMH; sin embargo, el porcentajes de recuperación de COCs fue
diferente entre los dos grupos de alta (56,2 %) y baja (39,5 %; P<0,05),
factor que diere con nuestro porcentaje de recuperación.
Estos resultados llevaron a determinar una correlación fuerte
entre la concentración de AMH y el número de COCs recuperados
(r=0,86; P<0,001), así como, con la calidad de COCs aptos obtenidos
(r=0,78; P<0,001). Resultados que ratican la correlación descrita
(r=0,78; P<0,001) en vaquillas de Holstein criadas en el trópico bajo
alimentadas con ración total mezclada [12].
TABLA II
Valores medios y error estándar de folículos aspirados, COCs recuperados y su clasicación obtenidos
en las 61 sesiones de OPU (32 grupo de alta y 29 en el grupo de baja concentración de AMH)
Variables Total (n=61) Grupo alta (n=32) Grupo baja (n=29) P
Folículos aspirados/sesión 17,3 ± 0,84 23,2 ± 0,41 10,8 ± 0,35 *
COCs recuperados/sesión 9,9 ± 0,57 13,4 ± 0,56 6,2 ± 0,27 *
% de recuperación de COCs 57,23 57,75 57,41 ns
COCs Tipo A 3,5 ± 0,27 4,9 ± 0,34 2,1 ± 0,21 *
COCs Tipo B 3,0 ± 0,24 4,1 ± 0,33 1,9 ± 0,19 *
COCs Tipo C 1,8 ± 0,17 2,3 ± 0,27 1,3 ± 0,16 *
COCs Tipo D 1,6 ± 0,19 2,2 ± 0,29 0,9 ± 0,19 *
COCs Aptos (A+B) 6,6 ± 0,42 8,9 ± 0,46 3,9 ± 0,29 *
COCs no Aptos (C+D) 3,4 ± 0,29 4,5 ± 0,43 2,2 ± 0,23 *
COCs: complejo cumulus ovocito. Total: valores correspondientes al total de vaquillas en estudio. Grupo de alto: animales
con mas de 20 folículos antrales. Grupo de bajo: animales con menos de 13 folículos antrales. *: diferencia estadística
entre grupos de alto y bajo RFA. Prueba de T de Student al 5 %. ns: no signicativo
Entre las tecnologías reproductivas existentes la combinación
de las biotécnicas OPU-PIVE son herramientas importantes para
la reproducción de material genético de calidad superior [21]. Sin
embargo, la competencia de los ovocitos es uno de los factores
limitantes más importantes encontrados durante la producción de
embriones in vitro [7]. Por lo tanto, conseguir mayor número de COCs
competentes (aptos) para ingresar al proceso de la PIVE es fundamental
para incrementar el número de embriones obtenidos al nal de este
proceso.
Los resultados obtenidos en el presente estudio demuestran que
las vaquillas del grupo con alta concentración de AMH proporcionaron
el doble de COCs aptos (8,9 ± 0,46 COCs) en comparación con los
obtenidos en el grupo de baja AMH (3,9 ± 0,29 COCs; P<0,05).
Característica de este tipo de animales que fueron descritas en otras
condiciones de manejo y ambientales [12]. Por lo tanto, seleccionar
animales con alto RFA permitirá contar con mayor población de FA,
mayor cantidad de COCs aptos y esto inuirá positivamente en los
resultados de la producción de embriones in vitro.
CONCLUSIONES
Los puntos de corte de la AMH de estos animales, criados en
condiciones de trópico alto y alimentados al pastoreo, dieren de los
descritos para bovinos en otras condiciones ambientales y de manejo.
Sin embargo, se ratica la existencia de una correlación alta y positiva
entre la concentración de la AMH y el RFA en el día del reinicio de la onda
folicular, lo cual lleva a determinar que la AMH es biomarcador conable
para seleccionar animales con alto RFA, característica que permite
obtener el doble de COCs aptos para la producción de embriones in vitro.
Conicto de Interés
Los autores declaran no tener conictos de intereses.
Relación de la AMH con la recuperación de ovocitos por OPU / Dután y col. ________________________________________________________
6 de 7
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