DOI: https://doi.org/10.52973/rcfcv-e32130
Recibido: 05/04/2022 Aceptado: 18/05/2022 Publicado: 10/06/2022
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Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXII, rcfcv-e32130, 1 - 5
RESUMEN
La tipicación sanguínea es un método de identicación de antígenos
en la supercie de los eritrocitos. Los tipos de grupos sanguíneos
sangre pueden ser evaluados utilizando pruebas rápidas para la
tipicación sanguínea en perros; en el presente trabajo se evaluaron
un total de 103 perros (Canis lupus familiaris). Los animales en estudio
se agruparon de acuerdo a la raza y sexo. Se tipicó a cada uno de
los perros con la prueba comercial Kabb Dog Blood®, se utilizó este
kit ya que hay otro estudio acerca de su especicidad y sensibilidad
que avala su uso. Después de identicar los tipos sanguíneos, se
escogieron a 3 donantes, uno de cada grupo DEA 1.1, DEA 1.2 positivo
y DEA 1- negativo para realizar la prueba cruzada con los 100 perros
restantes y determinar la compatibilidad in vitro. Los resultados
obtenidos con los 103 perros fueron 93,2% con DEA 1.1 positivos;
4,9 % fueron DEA 1.2 y el 1,9 % fueron 1- negativo. Se conrmó que el
tipo de sangre DEA 1- es el donante universal dado que en el
presente
estudio no hubo ningún tipo de aglutinación al cruzarla con los otros
tipos de sangre DEA 1.1 y DEA 1.2. Del total de las pruebas cruzadas
realizadas, el 5,3 % fueron incompatibles y el 94,7% compatibles. Se
destaca la ecacia, rapidez y lo sencillo que fue realizar la prueba,
aproximadamente de dos minutos (min), frente al método de pruebas
cruzadas que lleva 30 min aproximadamente, con lo que se ahorraría
tiempo en casos de emergencia en donde corre peligro la vida del
paciente.
Palabras clave: Compatibilidad sanguínea; transfusión sanguínea;
tipicación sanguínea; DEA 1.1; antígeno eritrocitario
ABSTRACT
Blood typing is a method of identifying antigens on the surface of
red blood cells. Blood types can be evaluated using rapid kits for
blood typing in dogs. In the present work, 103 dogs (Canis lupus
familiaris) were evaluated. The animals under study were grouped
according to breed and sex. Each dog was typed with the commercial
kit Kabb Dog Blood® (Korea). After identifying the blood types, three
donors from groups DEA 1.1, DEA 1.2, and DEA 1- were chosen for
crossmatching with the remaining 100 dogs to determine in vitro
compatibility. The results obtained with the 103 canine patients
were 93.2% DEA 1.1 positive, 4.9% were DEA 1.2, and 1.9% were 1-
negative. Therefore, it was conrmed that the blood type DEA 1 was
the universal donor since there was no agglutination in the present
study when crossed with the other blood types of DEA 1.1 and DEA 1.2.
Of the total crossmatches performed, 5.3 % were positive, and 94.7 %
were negative. It was emphasized the eciency, speed, and simplicity
of the test, which takes approximately two minute (min) compared to
the crossmatching method, which takes approximately 30 min, thus
saving time in emergency cases where the patient’s life is in danger.
Key words: Blood compatibility; blood transfusion; blood typing;
DEA 1.1; erythrocyte antigen
Tipicación sanguínea para la determinación de compatibilidad en perros
(Canis lupus familiaris)
Blood Typing for Determination of Compatibility in Dogs (Canis lupus familiaris)
Nota Técnica
Ángel Emilio Narváez-Rueda
1
* , Juan Carlos Armas-Ariza
1
y Matilde Lorena Zapata-Saavedra
2
1
Universidad Católica de Cuenca. Cuenca, Azuay, Ecuador.
2
Universidad Técnica de Machala. Machala, El Oro, Ecuador
*Correo electrónico: angel.narvaez.00@est.ucacue.edu.ec
Tipicación sanguínea en caninos / Narváez-Rueda y col. __________________________________________________________________________
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INTRODUCCION
La tipicación sanguínea es un método para la identicación de
antígenos en la supercie de los eritrocitos. Los tipos de grupo
sanguíneo pueden ser evaluados utilizando pruebas rápidas que
existen en el mercado especíca para perros (Canis lupus familiaris)
para tipicación sanguínea [9]. Los perros no tienen anticuerpos
naturales contra los antígenos eritrocitarios naturales del mismo
Dog Erythrocyte Antigen (DEA), pero eventualmente se sensibilizan
después de la primera transfusión incompatible. El conocimiento de
los grupos sanguíneos caninos, la inmunogenicidad y la incompatibilidad
es clínicamente útil para realizar transfusiones seguras sin riesgo de
sensibilización o el riesgo de desarrollar una reacción a la transfusión.
La determinación de los antígenos del grupo sanguíneo en perros
usando pruebas de tipicación o antisueros es considerablemente
menor debido a que rara vez se repiten las transfusiones de sangre
al mismo perro receptor [1].
Se han reportado en la especie hasta ocho grupos sanguíneos: DEA 1.1,
DEA 1.2, DEA 3, DEA 4, DEA 5, DEA 6, DEA 7, DEA 8. De todos ellos, el que
tiene mayor poder antigénico y por lo tanto provoca el mayor riesgo de
reacciones adversas es el DEA 1.1 [6]. En base a estos datos, el donante
ideal será un perro negativo al antígeno DEA 1.1. (Donante “universal”) [2].
Mientras que la tipicación de sangre detecta la presencia de los
antígenos del grupo sanguíneo en la membrana eritrocitaria, las pruebas
cruzadas determinan la presencia de anticuerpos en el plasma del
donante y receptor, que pudieran provocar reacciones en el momento
de la transfusión [3, 4]. Por lo tanto, se recomienda realizar esa prueba
siempre que exista algún riesgo de incompatibilidad o cuando no sea
posible determinar el grupo sanguíneo en perros que ya hayan recibido
una transfusión previa [3].
La prueba de reacción cruzada mayor, comprueba si el receptor
posee anticuerpos frente a los antígenos eritrocitarios del donante
(poniendo en contacto plasma del receptor con glóbulos rojos del
donante), mientras que la menor comprueba si el plasma del donante
contiene anticuerpos frente a los antígenos de los eritrocitos del
receptor [3]. También del mismo modo se debe incluir una reacción
control, en la que se mezclan eritrocitos y plasma del receptor.Si se
produce hemólisis y/o aglutinación en la reacción cruzada mayor,
no se podrá realizar la transfusión, debido a que el receptor tiene
anticuerpos contra los eritrocitos del donante. Si existe hemólisis
y/o aglutinación en la reacción cruzada menor, esto signica que el
donante tiene anticuerpos contra los eritrocitos del receptor, pero la
cantidad incluida en la sangre a transfundir no implica riesgos graves,
siempre y cuando sea una cruz de aglutinación, por lo que se podrá
realizar la transfusión, aunque vigilando estrechamente al paciente.
El grado de aglutinación se expresa de 1+ a 4+ [3].
Para la correcta realización de las pruebas cruzadas hay que lavar los
eritrocitos del donante y receptor varias veces [3]. Por lo que pueden no
ser prácticas en una situación de urgencia. En estos casos, aunque sean
mucho menos ables, se pueden realizar unas pruebas de compatibilidad
simplicadas, sin lavar los eritrocitos: simplemente se centrifuga la
sangre del donante y del receptor, y se realizan las tres reacciones (mayor,
menor y control) sobre tres portaobjetos mezclando en cada uno de ellos
3 gotas de plasma y 1 gota de eritrocitos, dejando incubar 2-5 minutos
(min), y mirando al microscopio para ver si existe aglutinación [3]. Las
pruebas comerciales que se usan actualmente son rápidas y ables,
por lo que resultan muy recomendables en situaciones de urgencia [4].
El objetivo del trabajo fue comparar la eciencia y la precisión
de la prueba comercial para perros KABB Dog Blood Typing Kit ®
(Suseong-gu Daegu Korea) como herramienta diagnostica en
transfusiones sanguíneas.
MATERIALES Y METODOS
Selección de la unidad experimental
Se evaluaron un total de 103 perros (Canis lupus familiaris) que
llegaron a la Clínica Veterinaria Scooby Doo en la Provincia de Santo
Domingo de los Tsachilas, Ecuador, en el tiempo que duro el estudio, a
los cuales se le extrajo 1 mililitro (mL) de sangre con anticoagulante con
ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) proveniente de la vena cefálica.
Los animales en estudio se agruparon de acuerdo a la raza y sexo.
Identicación del grupo tipo sanguíneo
Se tipicó a cada uno de los perros en el estudio con el kit comercial
Kabb Dog Blood, se utilizó este kit ya que hay otro estudio acerca
de su especicidad y sensibilidad que avala su uso [8]. Los tipos de
sangre 1.1 y 1.2 son muy importantes para la transfusión de sangre.
KABB BIO desarrolló con éxito el tipo de sangre canina que subdivide el
DEA1 (antígeno eritrocitario canino) por primera vez en todo el mundo
basándose en el hecho cientíco de que dos tipos de sangre diferentes
(1.1 y 1.2) no pueden estar presentes en el mismo glóbulo rojo [8].
Esta prueba comercial, se encuentra impregnada con un anticuerpo
monoclonal seco anti 1.1 y anti 1.2 en sus almohadillas correspondiente,
las cuales permiten determinar el tipo de grupo sanguíneo a la que
pertenece la muestra (FIG. 1).
El procedimiento de la prueba consistió en añadir una gota de sangre
en cada uno de los cuadros, DEA 1.1, DEA 1.2, y control. Posteriormente
se le añadió una gota de solución salina en cada uno de los pocillos
anteriormente mencionados, se homogenizó la muestra de cada uno
y se dejó reposar durante 2 min, luego se procedió a realizar la lectura
y catalogar según la aglutinación presentada.
Pruebas cruzadas
Después de identicar los tipos sanguíneos, se escogieron a 3
donantes del grupo DEA1.1, DEA1.2 positivos y DEA 1- negativo, se
formaron tres grupos para realizar la prueba cruzada con los 100
perros restantes y determinar la compatibilidad in vitro .
○ Grupo 1: Donador DEA 1.1 × Receptor DEA 1.1
○ Grupo 2: Donador DEA 1.2 × Receptor DEA 1.1
○ Grupo 3: Donador DEA 1- × Receptor DEA 1.1 – 1.2
Para ello se obtuvo 100 mL de sangre de los donantes en bolsas de
transfusión con anticoagulante (CPDA-1: citrato-fosfato-dextrosa-
adenina, marca Terumo, Japón) que posteriormente fueron refrigerados
a 4°C; (Indurama, RI-375CR, Ecuador); de los receptores se obtuvo
3 mL de sangre con anticoagulante. Las reacciones negativas en
las pruebas cruzadas mayor y menor indican compatibilidad. La
incompatibilidad fue diagnosticada, si al menos una de las pruebas
arrojó valores positivos. Los resultados positivos en el autocontrol
deben ser investigados o volver a repetir la prueba. Los donantes que
presentan una prueba de autocontrol positiva deben ser excluidos.
Las muestras sanguíneas de los donadores y receptores se
centrifugaron a 1.107 G (mediante centrifuga de la casa Hangzhou
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Weirui Biological Technology Co., Ltd. marca 800D de fabricación
China) por 10 min, con el objeto de separar los glóbulos rojos y el
plasma. El plasma se almacenó en tubos debidamente identicados.
Luego de realizada la centrifugación se procedió a preparar una
suspensión de glóbulos rojos al 4%. Para realizar la suspensión se
lavaron los glóbulos rojos de la siguiente manera:
A los glóbulos rojos que quedaron luego de la centrifugación de la
muestra se les agregó 3 mL de solución siológica, se homogenizó la
muestra, se centrifugó a 1.107 G por 5 min y se decantó el sobrenadante;
esta operación se repitió 3 veces.
Para realizar la suspensión de glóbulos rojos al 4% se tomaron
0,2mL de los glóbulos rojos lavados y se mezclaron con 4,8ml de
solución siológica.
La suspensión de glóbulos rojos lavados se almacenó en tubos
debidamente Identicados. Una vez realizado el procedimiento anterior
se procedió a realizar las pruebas cruzadas de la siguiente manera:
»
Prueba mayor de compatibilidad: 0,1 mL de la suspensión de
glóbulos rojos del donador + 0,1 mL de plasma del receptor.
»
Prueba menor de compatibilidad: 0,1 mL de la suspensión de
glóbulos rojos del receptor + 0,1 mL de plasma del donador.
»
Control del donador: 0,1 mL de la suspensión de glóbulos rojos
del donador + 0,1 mL de plasma del donador.
»
Control del receptor: 0,1 mL de la suspensión de glóbulos rojos
del receptor + 0,1 mL de plasma del receptor.
La muestra se incubó a temperatura de 28 y 5°C por 15 min, luego se
centrifugó a 1.107 G por 15 segundos (seg) y, por último, se interpretó
el resultado.
La lectura de la muestra se realizó de la siguiente forma:
Se examinó la muestra en busca de hemólisis al observar la presencia
de hemoglobina libre en el sobrenadante. Esto se realiza comparando
el color del sobrenadante de la muestra con el del control.
Se examinó la muestra en busca de hemaglutinación al agitar
gentilmente el tubo y observar la formación de un botón o agrupación
de células. La aglutinación se calicó de la siguiente manera:
• 4+: Un agregado sólido de células
• 3+: Varios agregados grandes
•
2+: Grandes aglutinaciones con agrupamientos más pequeños
•
1+: Muchos aglutinamientos pequeños y células libres en el fondo
• 0: Sin aglutinaciones
Todas las pruebas consideradas macroscópicamente como negativas
a la hemaglutinación, se conrmaron microscópicamente con poco
aumento (10X).
La prueba es negativa o compatible cuando los eritrocitos
se suspenden fácilmente. Una prueba positiva o incompatible
puede presentar hemólisis, hemaglutinación o ambas, todo este
procedimiento dura 30 minutos aproximadamente.
Análisis estadístico
Los resultados obtenidos de los grupos sanguíneos y las
pruebas cruzadas se caracterizaron utilizando estadística
descriptiva mediante el software SPSS [12].
Tipo sanguíneo 1.1 Tipo sanguíneo 1.2 Tipo sanguíneo 1 (-)
Falso
Kit comercial para determinación de grupos sanguíneos en caninos Kabb Dog Blood ® (Korea)
Tipicación sanguínea en caninos / Narváez-Rueda y col. __________________________________________________________________________
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RESULTADOS Y DISCUSION
Los resultados obtenidos se presentan en la TABLA I; en la misma
se aprecia que de los 103 perros estudiados, el 93,2% correspondieron
al grupo DEA 1.1 positivos; el 4,9% fueron DEA 1.2 positivo y el 1,9%
fueron DEA 1- negativo. Estos resultados son semejantes a los
expuestos por Riyaz y col. en el 2017 [11], donde indicaron que un 78%
de los perros estudiados en la ciudad de Punjab, India, fueron DEA 1
positivo este resultado podría estar inuenciado por la presencia de
una mayoría de razas con alta prevalencia de DEA 1 positivo.
Hale [5], en su estudio describió una prevalencia del 63,5% de
perros mestizos positivos para DEA 1,1. Un estudio similar realizado
por Medina y col. en 2017 [10] en un banco de sangre veterinario en
Italia, donde se evaluaron 7.414 muestras de sangre de perros, de los
que reportaron que hay una prevalencia de 61,2% DEA 1 positivo en
este banco de sangre [10]. Sin embargo, Kessler y col. [7], señalaron
que la falta de aloanticuerpos naturales, que ocurren de forma natural
y clínicamente relevantes, pueden descartar la necesidad de tener
sangre especíca tipicada para una primera transfusión [7].
Pruebas cruzadas
Los resultados obtenidos se presentan en la TABLA II. En el grupo
1, en la prueba mayor y menor hay reacciones negativas, es decir son
100 % compatibles; en el grupo 2 se obtuvo 16 perros positivos en la
prueba menor obtuvieron un 75 % de compatibilidad, los 84 perros
restantes tuvieron reacciones negativas en las prueba mayor y menor,
por lo que son 100 % compatibles; en el grupo 3, en la prueba mayor
y menor hay reacciones negativas con un 100 % de compatibilidad.
El resultado nal arrojo el 94,7% de los perros son compatibles con
los donadores y el 5,3% incompatibles.
Reacciones de las pruebas cruzadas
La bibliografía cita que los perros no poseen anticuerpos regulares
contra el DEA 1.1 en títulos signicativos como para dar una reacción
de incompatibilidad inmediata de tipo inmunológica en la primera
transfusión; según los resultados obtenidos se presentaron casos
positivos (presencia de aglutinación 1+) en perros sin transfusión
previa, lo cual pudo haber producido reacciones transfusionales
importantes como analaxis o hemolisis, de no haber realizado las
pruebas cruzadas. La prueba cruzada es una técnica sencilla, de fácil
TABLA I
Tipos Sanguíneos encontrados en el estudio
Raza
Número
de perros
Tipo Sanguineo
DEA 1-
Hembra Macho Hembra Macho Hembra Macho
Mestizo 41 26 9 2 2 1 1
Teckel 1 1 0 0 0 0 0
Bull Dog Frances 1 1 0 0 0 0 0
Bull Dog Ingles 3 3 0 0 0 0 0
Pastor Belga 1 1 0 0 0 0 0
Rottweiler 4 2 2 0 0 0 0
Shitzu 3 1 1 0 1 0 0
Labrador 4 4 0 0 0 0 0
Pekines 1 1 0 0 0 0 0
Terranova 1 1 0 0 0 0 0
Lhasa Apso 1 1 0 0 0 0 0
Pitbull 6 2 4 0 0 0 0
Golden 1 1 0 0 0 0 0
Husky 3 3 0 0 0 0 0
Yorkshire Terrier 1 0 1 0 0 0 0
Beagle 1 1 0 0 0 0 0
Pincher 3 2 1 0 0 0 0
Doberman 3 2 1 0 0 0 0
Caniche 13 5 8 0 0 0 0
Schnauzer 3 2 1 0 0 0 0
Bully 4 3 1 0 0 0 0
Cocker 3 2 1 0 0 0 0
Bull Terrier 1 1 0 0 0 0 0
Total 103 96 5 2
Porcentaje 100 % 93,2 % 4,9 % 1,9 %
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realización y de bajo costo que permite evidenciar compatibilidad
sanguínea entre Donante y Receptor, siendo de mucha ayuda en la
transfusión sanguínea (TABLA III).
CONCLUSIONES
Mediante la presente investigación se conrmó que el tipo de sangre
DEA 1- es el donante universal, ya que en el presente estudio no hubo
ningún tipo de aglutinación, al cruzarla con los otros tipos de sangre
DEA1.1 y DEA 1.2.
En las pruebas cruzadas realizadas en la presente investigación se
observó un porcentaje de incompatibilidad sanguínea del 5,3% y de
compatibilidad del 94,7%. El tipo de sangre que predominó en este
estudio fue el DEA 1.1 positivo, con 93,2% del total de individuos.
Se destacó la ecacia, rapidez y fácil realización de la prueba
Kabb Dog Blood ® (Korea), con un tiempo de aplicación aproximado
de 2 min frente al método de pruebas cruzadas que lleva 30 min
aproximadamente, lo cual permite ahorrar tiempo valioso en el manejo
de la emergencia, en donde corre peligro la vida del paciente, no
obstante, siempre será importante realizar las pruebas cruzadas
antes de cada transfusión.
CONFLICTO DE INTERESES
Los autores certican que no existen conictos de intereses en
el presente artículo.
TABLA II
Pruebas Cruzadas
Grupos Prueba Cruzada Prueba Mayor Prueba Menor Positivos Negativos
1
Donador DEA 1.1
×
Receptor DEA 1.1
Negativo Negativo 0 100
2
Donador DEA 1.2
×
Receptor DEA 1.1
Negativo Positivo 16 84
3
Donador DEA 1-
×
Receptor DEA 1.1 – 1.2
Negativo Negativo 0 100
Total 16 284
Porcentaje 5,3 % 94,7 %
TABLA III
Compatibilidad e incompatibilidad de las pruebas cruzadas
Variabilidad
de Prueba
Compatibilidad Incompatibilidad
prueba mayor (-) y
prueba menor (-) =
100 % 0 %
prueba mayor (-) y
prueba menor (+) =
75 % 25 %
prueba mayor (+) y
prueba menor (-) =
25 % 75 %
prueba mayor (+) y
prueba menor (+) =
0 % 100 %
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