DOI: https://doi.org/10.52973/rcfcv-e32117
Recibido: 04/02/2022 Aceptado: 05/03/2022 Publicado: 13/04/2022
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Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXII, rcfcv-e32117, 1 - 9
RESUMEN
En marzo de 2021, en el departamento de Cochabamba, provincia
Quillacollo, Bolivia, se detectó un brote de Salmonelosis. Se trató de
un lote de pollitas marrones de levante de la línea comercial H&N,
edad 4 a 5 días.La mortalidad ascendió al 30%, el resto mostraron
todas signos de deshidratación, deposición de uratos en uréteres,
hepatomegalia, taponamiento cloacal, esplenitis, saco vitelino de
color verduzco, vesícula biliar licuefacta de color amarillo, molleja
erosionada y ulcerosa. En cultivo bacteriológico de hígado, corazón
y médula ósea se obtuvo exclusivamente Salmonella spp. (inmóvil) en
regular cantidad, abundante cantidad en saco vitelino y escasa en
bilis. La prueba de Acriavina reveló presencia de cepa lisa (patógena).
En algunas muestras crecieron además escasamente, Eschericha coli
y Proteus spp. En incubadoras, los cultivos bacteriológicos de huevos
picados o licuefactos mostraron crecimiento de Salmonella spp. Todas
las muestras presentaron además alta contaminación con Proteus
spp. y Pseudomonas spp. A las reproductoras de las pollitas infectadas
les fue aplicado el fusil sanitario en la totalidad de los lotes. Los
aislamientos bacteriológicos de hígado, bazo, médula ósea, tonsilas
cecales e hisopados cloacales de otras reproductoras de la misma
granja, resultaron negativos a Salmonella spp. Sin embargo, se aisló
Salmonella spp. (inmóvil) de hisopados del contenido cloacal de aves
reproductoras muertas. Las pruebas bioquímicas de Glucosa, Lisina
descarboxilasa, Indol, Ornitina descarboxilasa y Manitol resultaron
positivas con producción de ácido y gas. Se analizaron las muestras
de ADN aisladas de varios casos positivos con PCR multiplex,
conrmando la presencia de Salmonella enterica biovar Pullorum en
un laboratorio ocial dependiente del Servicio Nacional de Sanidad
Agropecuaria e Inocuidad Alimentaria “SENASAG”, Cochabamba,
Bolivia, con lo cual queda ocialmente conrmado la presencia de
Salmonella enterica biovar Pullorum.
Palabras clave: Salmonella pullorum; tifoidea; PCR multiplex;
bioquímica; línea H&M
ABSTRACT
In March 2021, a Salmonella outbreak was detected in the Quillacollo
Province from the Cochabamba Department, Bolivia. It occurred in
5-day-old commercial layers from the H&N (Brown Nick) line. The
Mortality climbed to 30%, the rest of birds had dehydration signs,
urate deposition in ureters, hepatomegaly, cloacal clothing, enlarged
spleen, greenish vitelline sac, yellowish bile bladder content and
gizzard erosions. At the laboratory only Salmonella spp. (non-movil)
was detected from liver, heart, bone marrow (medium amount), higher
concentrations were obtained from vitelline sac, while small amounts
were detected from bile. The acriavin test revealed the presence of
a smooth Salmonella (pathogenic). In some cases, small amounts
of Eschericha coli and Proteus spp. were concurrently detected. At
the hatchery, the analysis of pipped and rotten eggs also yielded
Salmonella spp. All the hatchery samples showed high levels of
contamination with Proteus spp. y Pseudomonas spp. The breeders
of the contaminated chicks were eliminated. While the bacteriological
analysis from samples (liver, spleen, bone marrow, cecal tonsils,
cloacal swabs) obtained from other breeder ocks in the same farm
were negative to Salmonella spp. Nevertheless, positive results
could be obtained from dead breeders’ cloacal swabs regardless of
the ock. Biochemistry tests (Glucose,Lysine descarboxilase, indol,
Ornityn descarboxilase and Manitol) resulted positive with acid and gas
production. DNA samples were analyzed from several positive samples
using a multiplex PCR at the National Diagnostic Service Department
(SENASAG) in Cochabamba, Bolivia, confirming the presence of
Salmonella enterica biovar Pullorum.
Key words: Salmonella pullorum; typhoid; PCR multiplex;
biochemistry; H&M line
Re-emergencia de la Salmonella pullorum en ponedoras comerciales de
Cochabamba, Bolivia
Re-emergence of Salmonella pullorum in commercial layers from Cochabamba, Bolivia
Martha Caero-Castellón
1
* , Christian Villarroel-Dávalos
1
, Patricia Quispe-Corrales
1
y Sergio Emiro Rivera-Pirela
2
1
Asociación Departamental de Avicultores de Cochabamba (ADA Cochabamba), Centro de Investigación de Patología Aviar (CEINPA). Cochabamba, Bolivia.
2
Universidad del Zulia, Facultad de Ciencias Veterinarias. Maracaibo, Zulia, Venezuela. Correo electrónico: caeromartha@gmail.com
Re-emergencia de la Salmonella pullorum en Bolivia / Caero-Castellón y col. __________________________________________________________
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INTRODUCCIÓN
La infección por Salmonella aviar puede ocurrir en aves de corral de
forma aguda o crónica por uno o más miembros del género Salmonella,
familia Enterobacteriaceae. Las dos principales enfermedades
bacterianas que ocurren en las aves de corral a través del género
Salmonella son la ebre tifoidea aviar y la Pullorosis, que es causada
por S. gallinarum y S. pullorum, respectivamente. De varios serotipos
de Salmonella, solo alrededor del 10% de éstos se han aislado de
aves de corral. Además del pollo (Gallus gallus domesticus), también
se han informado infecciones por S. gallinarum y S. pullorum en
pavos (Meleagris gallopavo), gallinas de Guinea (Numida meleagris),
codornices (Coturnix coturnix) y faisanes (Phasianus colchicus) [2].
Pulido-Landínez [15] señaló que, todas las intervenciones en granjas
de reproductoras, criaderos, fábricas de pienso y granjas de pollos de
engorde relacionadas con el control de Salmonella jugarán un papel
crucial en el control y, las intervenciones establecidas en cada etapa
de la integración vertical contribuirán a la reducción de la presencia
no deseada de Salmonella en el producto nal y lotes sub-siguientes.
El control ambiental y la bioseguridad juegan un papel clave, ya que
los aislamientos de patógenos que a menudo se encuentran en las
aves alojadas, ingresan a las granjas no a través de los criadores sino
a través del medio ambiente y fómites [19].
La Pullorosis es una enfermedad de distribución mundial. Se
considera erradicada de la producción avícola en muchos países
desarrollados como Europa Occidental, Estados Unidos de América,
Canadá, Australia y Japón, donde se llevan a cabo programas de
control y prevención de forma continua y rigurosa. Los informes de
Pullorosis, con pérdidas significativas para las aves de corral son
más comunes en países en desarrollo como México, América Latina,
Medio Oriente, India y África [8]. Los pollos y pavos recién nacidos
con enfermedad sistémica y portadores son las principales fuentes de
infección. S. pullorum, a pesar de ser más especíco de pollos y pavos,
puede albergar otras aves como, gansos (Anser anser), faisanes-
codornices (Phasianidae), loros (Psittacoidea), gorriones (Passer
domesticus) y canarios (Serinus canaria). Sin embargo, los pollos son
hospedadores naturales del agente etiológico. Además, Wei y col. [23]
citan que, las aves silvestres y migratorias pueden ser reservorios de
Salmonella patógena y resistente, siendo un gran riesgo para las aves
alojadas en granjas, así como para la salud pública.
Salmonella pullorum se transmite de animales infectados a nuevos
hospedadores, a través de las heces contaminadas, que se esparcen
en los criaderos de aves contaminando así el medio ambiente. La
sangre, los órganos, los cadáveres, las conchas y los fragmentos
de huevos infectados en las incubadoras también son la vía de
eliminación del agente. Los pollitos después de la eclosión nacen
húmedos, y este líquido presente al nacer también puede contener el
agente. La Pullorosis aviar o diarrea blanca es especíca de las aves
afectando principalmente individuos jóvenes, con más morbilidad
que mortalidad y producida por la S. pullorum, responsable del
estado de portador debido a sus características individuales,
constituyendo un grave problema económico para la producción
avícola en países donde las medidas de control no son ecientes.
Produce una sintomatología menos dramática que la ebre tifoidea
y se caracteriza principalmente por diarreas blanquecinas, abdomen
inamado y retardo en el crecimiento. Causa una infección sistémica
con hepato-esplenomegalia y lesiones puntuales blanquecinas en
hígado y bazo, en ambos sexos. Infecta los huevos, por lo cual los
embriones nacen infectados internamente en sus sacos vitelinos.
En su forma aguda, la Pullorosis es una enfermedad prácticamente
exclusiva de los polluelos y el agente se puede recuperar a partir de
casi todos los órganos, los tejidos y las heces. En las aves mayores,
que también llegan a ser portadoras, la S. pullorum se aísla sobre
todo a partir de los óvulos y del oviducto y sólo ocasionalmente de
otros órganos y tejidos, incluyendo el tracto digestivo [1, 21]
Durante los últimos años (a) ha habido una explosión de información
genética e inmunológica sobre la biología de estos microorganismos,
empezando a contribuir a una mejor comprensión del agente y su
interacción con el hospedador. Varias características distinguen
claramente S. enterica serovar pullorum de las otras Salmonelas. La
más llamativa es la disposición extraordinaria del séptimo fragmento
I-CeuI. Esta disposición especial del séptimo fragmento I-CeuI vistos
en la cepa RKS5078 representa el tipo dominante del genoma de S.
enterica serovar Pullorum. La mayoría de las cepas de S. enterica serovar
Pullorum toman esta estructura particular del genoma [9, 12, 16].
Las pruebas de diagnóstico serológico para S. pullorum
generalmente son descartadas por el uso de vacunas vivas e
inactivadas contra S. gallinarum, S. enteritidis y S. typhimurium.
La vacuna viva con S. gallinarum (9R) y las vacunas inactivadas,
intereren con la interprtetacion de las pruebas serológicas anti-
pullorum, por lo tanto, el control debe hacerse en aves no vacunadas,
pero de manera obligatoria. La eliminación de la prueba de Pullorum
aumenta el riesgo de ignorar la presencia solapada de aves infectadas
con Pullorosis, favoreciendo su permanencia y diseminación en las
granjas [16].
Los datos ociales sobre prevalencia de infecciones por Salmonelosis
aviar en Venezuela son escasos; sin embargo, en el año 2011, el INSAI
(Instituto Nacional de Salud Agrícola Integral de Venezuela) presentó
cifras que indican la presencia de la infección en la población avícola,
distribuidas en gran parte del territorio nacional, identicando no
solo S. gallinarum y S. pullorum, sino también Salmonellas spp., de
los grupos B y C (FIG. 1) [16].
En México, no hay presencia de Pullorosis desde hace menos de
tres décadas, y el último brote de tifosis aviar se presentó de manera
aislada en aves de traspatio en noviembre de 2015. En este último
Figura 1. Focos de Salmonelosis Aviar en la República Bolivariana de
Venezuela 2005-2010. Adaptado de Rivera-Pirela, S. 2018
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evento, se registró un caso de tifosis en 280 aves, las cuales fueron
eliminadas como parte de las medidas zoosanitarias impuestas,
además de las de bioseguridad pertinentes. Actualmente ambas
enfermedades se encuentran en el grupo 1 del Acuerdo mediante
el cual se dan a conocer en los Estados Unidos Mexicanos, las
enfermedades, plagas exóticas y endémicas, de notificación
obligatoria de los animales terrestres y acuáticos, inexistentes en
el territorio nacional o que han sido erradicadas del país y que, por
su rápida diseminación y afectación al sector y riesgo para la salud
pública, son consideradas de noticación inmediata obligatoria a las
dependencias ociales de salud animal y sanidad acuícola del país [17].
Rivera [16] declaró a la S. pullorum como un “enemigo silencioso”
debido a sus múltiples características diferenciales con el resto de las
Salmonellas, inclusive la S. gallinarum y sobre todo el establecimiento
de un estado de portador. Preferencialmente ataca aves jóvenes
provenientes de huevos infectados desde las Reproductoras. Es clave
la ausencia de inamación gastrointestinal posterior a la infección
con S. pullorum. Su respuesta inmunitaria tipo humoral, TH2 con
elevada producción de IL-4, facilita su permanencia en macrófagos
de manera casi indenida y su seguro pase al ovario y oviducto para
contaminar huevos fértiles que darán origen a huevos embrionados
en la incubacion. El estado de Portador de la S. pullorum forma parte
de un sosticado mecanismo de evasión de la respuesta inmunitaria
exclusivo de esta especie de Salmonella. El genoma de la S. pullorum
es único y exclusivo, aún se encuentra en estudio y no se conoce en su
totalidad, lo cual ha impedido la elaboración de vacunas comerciales
efectivas. Las granjas positivas a S. pullorum deberían ser declaradas
en cuarentena, eliminar todos los semovientes y repobladas, posterior
a una exhaustiva limpieza y desinfección con aves provenientes de
zonas libres de Salmonella.
El método de referencia utilizado para el diagnóstico de S.
gallinarum y S. pullorum durante los brotes es el cultivo microbiológico
para el aislamiento, la identicación bioquímica y la serotipicación
del aislado [10, 18]. Los organismos son bacilos gramnegativos, no
esporulados de 1,0-2,5 micrometros (µm) de longitud y 0,3-1,5 µm
de anchura. Se consideran inmóviles en condiciones normales y
anaeróbicos facultativos. Puede ser aislada de sangre, buche, higado,
bazo, corazon, pulmones, ciego, saco vitelino y órganos reproductivos
de pollitas, ponedoras y reproductoras adultas posterior a la infección
[5]. Puede crecer en medios bacteriologicos selectivos y no selectivos,
tales como MacConkey, Verde brillante y agar Desoxicolato de Xilosa-
Lisina (XLD Agar-Xylose-Lysine Deoxycholate Agar). Las colonias
en agar sangre o nutritivos son pequeñas (1-2 milimetros (mm) de
diámetro), circulares, relucientes, lisas, ligeramente elevadas, entre
24 a 48 horas (h) de incubación. S. pullorum crece más lentamente
que S. gallinarum [20].
Las diferentes especies de Salmonella no fermentan la lactosa ni
la sucrosa pero si la dextrosa y el manitol, produciendo ácido y gas,
S. pullorum produce ácido y gas mientras que S. gallinarum produce
solo ácido. Todos los aislados son Indol negativos, Rojo de metilo
positivos y Voges Proskaüer negativos, características exclusivas
de las Salmonella spp.
Los medios de agar triple azúcar-hierro (TSI); agar lisina-hierro
(o medio de descarboxilación de l-lisina); agar urea de Christensen;
medio triptona/triptófano para la reacción del indol; medio con
glucosa y una campana de Durham para detectar la producción
de ácido y gas; medio con dulcitol, medio con maltosa, medio de
descarboxilación de ornitina y medio semisólido para comprobar la
movilidad, disciernen entre S. pullorum, S. gallinarum y otras especies
de Salmonella spp. (TABLA I).
Además de los métodos directos utilizados para aislar estas
bacterias, los métodos indirectos son importantes para los estudios
epidemiológicos y el seguimiento de las condiciones sanitarias en las
parvadas. Las pruebas serológicas como ELISA y la prueba rápida de
seroaglutinación pueden detectar anticuerpos contra Salmonella spp. [3].
La prueba de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es
capaz de detectar e identicar el ácido desoxirribonucleico (ADN) del
patógeno. Se han desarrollado pruebas moleculares con técnicas de
ribotipicación en laboratorios de investigación y se pueden utilizar
para la conrmación y la diferenciación entre S. gallinarum y S. pullorum
[7]. Von Hertwig y col. [22] desarrollaron una PCR multiplex en tiempo
real para detectar y diferenciar especícamente las biovariedades
S. gallinarum y S. pullorum estrechamente relacionadas y cuanticar
simultáneamente el número de bacterias en las muestras.
Se describe en esta oportunidad un brote de S. pullorum en un lote
de pollitas de levante de ponedoras comerciales de la línea H&N, en
el departamento de Cochabamba, Bolivia, a principios del año 2021.
TABLA I
Investigación Bioquímica para Salmonella pullorum
y Salmonella gallinarum
Ensayo Bioquímico S. pullorum S. gallinarum
TSI Glucosa
(producción de ácido)
+ +
TSI Glucosa
(producción de gas)
V -
TSI Lactosa - -
TSI Sacarosa - -
TSI Sulfuro de Hidrógeno V V
Gas a partir de Glucosa
(medio con campana de Durham)
+ -
Hidrólisis de Urea - -
Descarboxilación de Lisina + +
Descarboxilación de Ornitina + -
Fermentación de Maltosa - o más tarde + +
Dulcitol - +
Movilidad - -
TSI: Agar Triple Azúcar Hierro; +: reacción positiva del 90 % o más
en 1 o 2 días; -: reacción negativa (90 % o más); V: reacción variable.
Fuente: OIE. 2021
Re-emergencia de la Salmonella pullorum en Bolivia / Caero-Castellón y col. __________________________________________________________
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MATERIALES Y MÉTODOS
Animales
Se trata de un lote de levante de 27.000 pollitas, línea: H&N, edad:
4 a 5 días de granjas ubicadas en el departamento Cochabamba,
provincia Quillacollo, Bolivia, situadas en 17°23′39″S |66°16′21″O,
con síntomas de Salmonelosis, a los cuales se les practicó análisis
anatomopatológicos (examen macroscópico), bacteriológico, pruebas
bioquímicas y moleculares. Se observó una mortalidad del 30%, el
resto de las pollitas mostraron todas signos de deshidratación,
deposición de uratos en uréteres, hepatomegalia, taponamiento
cloacal, esplenitis, saco vitelino de color verduzco, vesícula biliar
licuefacta de color amarillo, molleja erosionada y ulcerosa. Se
aplicó el fusil sanitario a las 20.000 pollitas restantes. Igualmente se
sacricaron 3 lotes de 5.000 Reproductoras entre 27 y 60 semanas
en producción.
Bacteriología
Con base en lo descrito en el Manual Terrestre de la Organización
Mundial de Sanidad Animal (OIE) [13], se realizaron los exámenes
bacteriológicos en el laboratorio CEINPA de la Asociación
Departamental de Avicultores Cochabamba (ADA), Bolivia:
Medios de cultivo directo
• Tripticase Soya Agar - TSA
• Agar MacConkey - McC
Medios de cultivos selectivos
• Caldo Tetrationato Verde Brillante - TT
• Agar Verde Brillante – BGA
Medios de cultivo utilizado en identicación bioquímica
• Agar TSI (Triple Azúcar-Hierro)
• Agar Lisina Descarboxilasa
• Agar Citrato de Simmons
• Agar SIM (Sulfuro-Indol-Movilidad)
• Caldo RM/VP (Rojo de Metilo / Voges Proskaüer)
• Agar MIO (Movilidad-Indol-Ornitina)
• Agar Manitol
Pruebas Moleculares
La prueba de PCR multiplex para Salmonella se realizó en LIDIVECO
– UNALAB Cochabamba, laboratorio oficial dependiente del Servicio
Nacional de Sanidad Agropecuaria e Inocuidad Alimentaria (SENASAG)
[22].
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se detectó un brote de Salmonelosis en el departamento de
Cochabamba, provincia Quillacollo, Bolivia conrmado en marzo de
2021. Se trata de un lote de pollitas de levante de la Línea H&N, edad
4 a 5 días de edad, al cual se le hizo el seguimiento en la incubadora
y granjas de reproductoras. Las pruebas anatomopatológicas
(exámenes macroscópicos) y los aislamientos bacteriológicos, junto
a las pruebas de Acridina, bioquímicas y nalmente el PCR multiplex,
conrman la presencia de S. enterica biovar Pullorum, cuyo origen
parece ubicarse en las granjas reproductoras.
En el levante de pollitas, línea H&N, edad: 4 – 5 días, caso I, se
efectuaron aislamientos bacterianos en hígado, corazón, médula
ósea, saco vitelino y bilis a un total de 8 pollitas (FIG. 2), obteniéndose
exclusivamente Salmonella spp. (inmóvil). La prueba de Acriavina
reveló la presencia de cepa lisa (patógena) de Salmonella (TABLA II).
En el caso II, correspondiente al levante de pollitas, línea H&N,
edad: 5 días, en el examen bacteriológico se aisló principalmente
la Salmonella spp. (inmóvil) para un total de 20 pollitas, en todos
los órganos evaluados, acompañada de la E. coli, (FIG. 2). En bilis
exclusivamente, se aisló además Proteus spp. (TABLA IV). En todas las
granjas evaluadas (G3-G5), la prueba de Acriavina reveló la presencia
de cepa Lisa (patógena) de Salmonella (TABLA III).
En este mismo lote se evaluaron los signos anatomopatológicos
que afectaron vesícula biliar, hígado, molleja y el sistema urinario,
en un total de 44 pollitas afectadas de las granjas G3-G5 (TABLA IV).
En el caso III se evaluó un lote de 10 pollitas de Levante de la línea:
H&N, edad 4 - 5 días, se practicaron exámenes bacteriológicos y
anatomopatológicos (lesiones macroscópicas), aislándose en todas
las muestras Salmonella spp. (inmóvil), acompañada en hígado con
Enterobacter spp., y en molleja con E. coli. La prueba de Acriavina
reveló la presencia de cepa lisa (patógena) de Salmonella (TABLA V).
FIGURA 2. Cultivos directos y selectivos para Salmonella spp.
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Ensayo en planta de incubación
Todas las muestras presentaron alta contaminación con Proteus
spp. y Pseudomonas spp. y el 40% de los embriones remitidos estaban
licuados. El desarrollo embrionario de los embriones corresponde a
pocas horas de incubación y hasta antes de los 7 días (TABLA VI).
Resultados en aves reproductoras
El lote de donde se originaron los embriones y las pollitas positivas a
Salmonella spp. (inmóvil) fue sometido a fusil sanitario. En total fueron
3 lotes de 5.000 aves con edades comprendidas entre 27 y 60 semanas.
La Salmonella spp. resultó ausente de órganos de Reproductoras de 60
semanas, especialmente hígado, bazo, médula ósea y tonsilas cecales,
en 8 hisopados cecales de piso de Reproductoras de 27-39 semanas
de edad y en 16 hisopados cloacales.
En Reproductoras de 43 semanas se investigó en órganos de aves
muertas, con hisopados de contenido cecal, obteniendo muestras
de aves positivas con Salmonella spp. (inmóvil) (FIG. 3). Según los
resultados bacteriológicos y bioquímicos, la reacción a la ornitina (+)
y la generación de ácido y gas en presencia de Manitol, corroboran la
presencia de S. enterica biovar Pullorum (TABLA VII).
Las muestras de los casos III y IV conrmaron la presencia de Salmonella
enterica biovar Pullorum, según consta en el Informe de ensayo Ocial
del Ministerio de Desarrollo Rural y Tierras, Servicio Nacional de Sanidad
Agropecuaria e Inocuidad Alimentaria-SENASAG, Unidad Nacional de
Laboratorios, UNALAB CBBA, Cochabamba Bolivia (FIG. 4).
La ebre tifoidea aviar afecta gravemente el desarrollo y la producción
de la industria avícola. Conseguir información epidemiológica
ocial sobre la infección de Salmonella spp. es algo complejo, sin
embargo existen datos de otras regiones del mundo que indican
los elevados costos que ello representa, con el atenuante de que
en muchos de esos países se llevan estrictas medidas en toda la
estructura sanitaria para el control de la Salmonelosis, e incluso de
TABLA II
CASO I. Lesiones macroscópicas y examen bacteriológico.
Levante de pollitas, línea H&N, edad 4 - 5 días
Número
de aves
Lesiones
Macroscópicas
(Signos Post Mortem)
Aislamientos
bacterianos en
Resultados
8/8
Deposición de
uratos en uréteres
Hígado
Crece regular
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
7/8
Hepatomegalia,
taponamiento cloacal
Corazón
Crece regular
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
3/8
Esplenitis, saco
vitelino de color
verduzco, vesícula
biliar licuefacta de
color amarillo
Médula ósea
Crece regular
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
2/8
Molleja erosionada
y ulcerosa
Saco vitelino
Crece abundante
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
- - Bilis
Crece escasa
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
- -
Prueba de
Acriavina
Presencia de
Salmonella
spp. cepa lisa
(patógena)
TABLA III
CASO II. Levante de pollitas, línea H&N, edad 5 días. Aislamientos bacterianos.
Aislamientos
bacterianos en
Granja 3 Granja 4 Granja 5
Hígado
Crece escasa cantidad de Escherichia coli
y abundante Salmonella spp. (inmóvil)
Crece una colonia de E. coli y abundante
cantidad de Salmonella spp. (inmóvil)
Crece regular cantidad de E.coli y
abundante Salmonella spp. (inmóvil)
Bazo
Crece escasa cantidad de E.coli y
abundante Salmonella spp. (inmóvil)
Crece escasa cantidad de E.coli y
regular Salmonella spp. (inmóvil)
Crece regular cantidad de E.coli
y Salmonella spp. (inmóvil)
Corazón
Crece escasa cantidad de E.coli y
abundante Salmonella spp. (inmóvil)
Crecen dos colonias de E. coli y regular
cantidad de Salmonella spp. (inmóvil)
Crece regular cantidad de E.coli y abundante
cantidad de Salmonella spp. (inmóvil)
Médula ósea
Crece escasa cantidad de E.coli y
regular Salmonella spp. (inmóvil)
Crece escasa cantidad de E. coli y
regular Salmonella spp. (inmóvil)
Crece escasa cantidad de E. coli
y Salmonella spp. (inmóvil)
Saco vitelino
Crece escasa cantidad de E.coli y
regular Salmonella spp. (inmóvil)
Crecen seis colonias de E. coli y regular
cantidad de Salmonella spp. (inmóvil)
Crece regular cantidad de E.coli y
abundante Salmonella spp. (inmóvil)
Bilis
Crece escasa cantidad de E.coli y
regular Salmonella spp. (inmóvil)
Crece escasa cantidad de E.coli, Proteus
spp. y Salmonella spp. (inmóvil)
Crece regular cantidad de E.coli
y Salmonella spp. (inmóvil)
Prueba de
Acriavina
Presencia de cepa lisa (patógena) Presencia de cepa Lisa (patógena) Presencia de cepa lisa (patógena)
Re-emergencia de la Salmonella pullorum en Bolivia / Caero-Castellón y col. __________________________________________________________
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su erradicación en el caso de S. gallinarum y S. pullorum, habiéndose
decretados libres de tifosis, por ausencia de casos, desde el año
2015 [17]. Este brote afecto a 27.000 pollitas en levante, las cuales
sufrieron un 30% de mortalidad, observándose en el resto, una
morbilidad superior al 80%, por lo cual fueron sacricadas en su
totalidad. Igualmente, se les aplico el fusil sanitario a 3 lotes de 5.000
Reproductoras, madres de estas pollitas y se retiraron sus huevos
fértiles de la incubadora. El costo directo se estima en 500.000 USD,
pudiendo totalizar hasta 1 millón de dólares en pérdidas indirectas.
TABLA IV
Caso II. Lesiones macroscópicas. Levante de pollitas,
línea H&N, edad 5 días. Granjas G3-G5
Granja
Número
de aves
Lesiones macroscópicas
(Signos Post Mortem)
G3
12/20
Vesícula biliar distendida,
esplenomegalia, onfalitis.
8/20 Focos necróticos en hígado
G4
14/20
Esplenomegalia, focos necróticos
en hígado, onfalitis
13/20 Vesícula biliar distendida
8/20 molleja con erosiones
6/20
Deposición de uratos en uréteres,
molleja erosionada,
G5
3/4 Focos necróticos en hígado, onfalitis
2/4 Vesícula biliar distendida, molleja erosionada
1/4 Deposición de uratos en uréteres
TABLA V
Caso III. Lesiones macroscópicas y aislamientos bacteriológicos.
Levante de pollitas, línea H&N, edad 4 - 5 días
Número
de aves
Lesiones
Macroscópicas
(Signos Post Mortem)
Aislamientos
bacterianos en:
Resultados
10/10 Hígado friable Hígado
Crecen tres colonias
de Enterobacter
spp, y abundante
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
9/10
Deposición de
uratos en uréteres
Corazón
Crece abundante
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
8/10
Hígado con
focos necróticos
blanquecinos, vesícula
biliar distendida
Médula ósea
Crece escasa
cantidad de
Enterobacter spp. y
regular Salmonella
spp. (inmóvil)
6/10
Hepatomegalia,
onfalitis, nefritis
intersticial, onfalitis
Saco vitelino
Crece escasa
cantidad de
Salmonella spp.
(inmóvil)
4/10
Molleja erosionada,
bilis licuefacto y de
color amarillo. Nefritis
degenerativa,
Bilis
Crece escasa
cantidad de
Escherichia coli
y abundante
Salmonella spp.
(inmóvil)
3/10 Molleja ulcerosa - -
Prueba
de
acriavina
Presencia de cepa
lisa (patógena)
- -
TABLA VI
Ensayo en la planta de incubación (Muestra IV)
Muestras Investigación de Salmonella spp.
L-3 huevo-embrión
picado no nacido
Presencia
L-3 huevo-licuefacto Presencia
L-4 huevo-embrión
picado no nacido
Ausencia
L-4 huevo-licuefacto Ausencia
TABLA VII
Medios de cultivo utilizados en identicación bioquímica de los
alimentos bacteriológicos para Salmonellas
Medio de
Cultivo
Reacción Resultado Observaciones
TSI A/K
Glucosa +
Lactosa -
Sacarosa -
Gas ± Escaso
SH
2
±
Escasa producción
mayor a 24 h
LIA
Lisina Descarboxilasa +
SH2 ±
Escasa producción
mayor a 24 h
CS Citrato -
U Urea -
SIM
SH2 ±
Escasa producción
mayor a 24 h
Indol +
Motilidad -
RM / VP
Rojo de metilo d
+ mayor a 72 h. Escaso
enturbiamiento
Voges Proskaüer -
MIO
Motilidad -
Indol +
Ornitina Descarboxilasa +
Manitol Manitol + Ácido y gas
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FIGURA 3. Resultados medios de cultivos, utilizados para la
identicación bioquímica diferencial para Salmonella pullorum y
Salmonella gallinarum
En Brasil, el Plan Nacional de Sanidad Avícola estableció
procedimientos para evitar la entrada y propagación de esta enfermedad
en las granjas avícolas, fortaleciendo aspectos como los programas
de bioseguridad y vacunación en las granjas avícolas, asegurando
una mejor competitividad en la comercialización de estos productos.
FIGURA 4. Ensayo de biología molecular para Salmonella pullorum.
Informe Ocial del Ministerio de Desarrollo Rural y Tierras, Servicio
Nacional de Sanidad Agropecuaria e Inocuidad Alimentaria-SENASAG,
Unidad Nacional de Laboratorios, UNALAB CBBA. Cochabamba, Bolivia
Re-emergencia de la Salmonella pullorum en Bolivia / Caero-Castellón y col. __________________________________________________________
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A pesar de esto, se aisló S. gallinarum de muestras recolectadas en
la necropsia de pollitos, de un brote con una tasa de mortalidad del
33,7%, al noveno d después del nacimiento. Las colonias sospechosas
de Salmonella spp. fueron aisladas de un grupo de órganos (hígado, bazo,
corazón y saco vitelino). En las pruebas bioquímicas y serológicas, las
colonias fueron compatibles con S. gallinarum. La conrmación del
serotipo se realizó mediante caracterización antigénica para Salmonella
spp. y por Premi® test [14]. Resultados obtenidos del periodo 2018-
2019 en Cochabamba, Bolivia muestran una incidencia del 28,5% de la
Salmonella spp. (inmóvil) y una ausencia de 70,9% [24].
Los planes de control deberían retomar la prueba serológica con el
antígeno de Pullorum [11, 13] en levante de pollitas, para descartar y
eliminar las aves positivas, previo a la fecha de aplicación de vacunas
parenterales vivas o inactivadas contra Salmonella.
Nuevas iniciativas de investigación demuestran que la preocupación
sobre la reemergencia de la S. pullorum sigue vigente en el mundo. Se
desarrolló el mutante waaL en un spiC mutante con características
de seguridad, ecacia y DIVA (Diferenciación de Animales Infectados
y Vacunados), vacuna candidata para Salmonella Pullorum Δ spiC
Δ waaL, evaluada en pollos de engorde. El lipopolisacárido (LPS)
truncado en la cepa vacunal tiene un uso diferenciador, tanto como
marcador bacteriológico (fenotipo rugoso) como marcador serológico
que facilita la diferenciación entre pollos infectados y vacunados [4].
De ser aprobada, esta candidata vacunal aportará otra excelente
alternativa para apoyar las medidas de control frente a la Pulloriosis
aviar.
CONCLUSIONES
Queda conrmada la re-emergencia en Bolivia, de la Salmonella
enterica biovar Pullorum. Las características estructurales complejas
del genoma de la S. pullorum, su sosticado mecanismo de infección
a nivel de la mucosa intestinal, su capacidad para modular la
respuesta inmunitaria favoreciendo el estado de “portador” y
posterior transmisión al ave recién nacida, le otorgan a esta
Salmonella caracteres únicos que deben ser combatidos, retomando
las tradicionales pruebas serologicas de Pullorosis, aún vigentes en
los manuales de la OIE como vigilancia epidemiológica y diseñando
otras medidas de control, fundamentadas en los nuevos avances del
conocimiento sobre esta bacteria, incluyendo las nuevas vacunas.
La re-emergencia de S. pullorum en la región de Cochabamba,
Bolivia, sorpresivamente en pleno corazón geográfico de
Latinoamérica, refuerza la hipótesis planteada con anterioridad sobre
la vigencia del estado de portador silente de esta bacteria, por sus
propiedades inmunomoduladoras y las características genómicas
superiores al resto de las Salmonellas.
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