Caracterización parcial de una actividad fosfatasa alcalina excretada por Bacillus stearothermophilus - Storaci, Vincenzo; Kurz, Liliana; Wilkesman, Jeff (Ciencia, 1970)
La fosfatasa alcalina (AP; EC 3.1.3.1) desfosforila compuestos monofosfatados a pH básico y es usada en estuches comerciales para el diagnóstico de enfermedades hepáticas, intestinales, óseas y endocrinas (hiperparatiroidismo). Una actividad AP excretada al medio de cultivo por Bacillus stearothermophilus fue aislada, identificada, purificada parcialmente y caracterizada. Las bacterias fueron inoculadas en medio líquido con triptona, extracto de levadura, adenosin-5-monofosfato y tampón glicina de sodio pHÂ 10 a 55°C. La actividad AP obtenida de un filtrado libre de células luego de 120Â h de cultivo, fue ensayada con 2Â mM p-nitrofenilfosfato en 50Â mM tampón glicina de sodio, pHÂ 10 y 1,5Â mM MgCl2. A los 20Â min de incubación, la reacción fue detenida con 0,2Â M NaOH y se cuantificó la liberación de p-nitrofenol a 410Â nm. La AP fue purificada parcialmente por DEAE-celulosa, con una actividad específica de 0,3Â ÂµmolÂ·min”“1Â·mg. La actividad fue máxima a 60°C y pHÂ 10, aunque se registró actividad hasta 80°C. La actividad AP fue estimulada por 1Â mM MgCl2 e inhibida por 0,1Â mM ZnCl2, 0,1Â mM EDTA y 10Â mM fosfato inorgánico. Se determinó un peso molecular (PM) de ~90Â kDa mediante zimografía. Los resultados indican que la enzima aislada pudiera ser relevante en aplicaciones industriales, clínicas y biotecnológicas, por su resistencia térmica y alcalina.