Caracterización parcial de una actividad fosfatasa alcalina excretada por Bacillus stearothermophilus - Storaci, Vincenzo; Kurz, Liliana; Wilkesman, Jeff (Ciencia)
<!–[if gte mso 9]> Normal 0 21 false false false MicrosoftInternetExplorer4 <![endif]–><!–[if gte mso 9]> <![endif]–><!–[if !mso]> <![endif]–> <!– /* Font Definitions */ @font-face font-family:Helvetica; panose-1:2 11 6 4 2 2 2 2 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:7 0 0 0 147 0; @font-face font-family:Bookman; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-alt:"Bookman Old Style"; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:roman; mso-font-format:other; mso-font-pitch:auto; mso-font-signature:0 0 0 0 0 0; /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; @page Section1 size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0; div.Section1 page:Section1; –> <!–[if gte mso 10]> <![endif]–> La fosfatasa alcalina (AP; EC 3.1.3.1) desfosforila compuestos monofosfatados a pH básico y es usada en estuches comerciales para el diagnóstico de enfermedades hepáticas, intestinales, óseas y endocrinas (hiperparatiroidismo). Una actividad AP excretada al medio de cultivo por Bacillus stearothermophilus fue aislada, identificada, purificada parcialmente y caracterizada. Las bacterias fueron inoculadas en medio líquido con triptona, extracto de levadura, adenosin-5-monofosfato y tampón glicina de sodio pHÂ 10 a 55°C. La actividad AP obtenida de un filtrado libre de células luego de 120Â h de cultivo, fue ensayada con 2Â mM p-nitrofenilfosfato en 50Â mM tampón glicina de sodio, pHÂ 10 y 1,5Â mM MgCl2. A los 20Â min de incubación, la reacción fue detenida con 0,2Â M NaOH y se cuantificó la liberación de p-nitrofenol a 410Â nm. La AP fue purificada parcialmente por DEAE-celulosa, con una actividad específica de 0,3Â ÂµmolÂ·min”“1Â·mg. La actividad fue máxima a 60°C y pHÂ 10, aunque se registró actividad hasta 80°C. La actividad AP fue estimulada por 1Â mM MgCl2 e inhibida por 0,1Â mM ZnCl2, 0,1Â mM EDTA y 10Â mM fosfato inorgánico. Se determinó un peso molecular (PM) de 90Â kDa mediante zimografía. Los resultados indican que la enzima aislada pudiera ser relevante en aplicaciones industriales, clínicas y biotecnológicas, por su resistencia térmica y alcalina.